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目的:角膜严重损伤后容易诱发角膜纤维化瘢痕的形成,严重影响视力。受创面转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激暴露的角膜基质细胞转分化为肌成纤维细胞的形成被认为是角膜瘢痕形成的根本原因。非编码RNA在很多器官的纤维化形成中发挥着重要作用,但其在角膜纤维化瘢痕中的研究罕见报道。本研究旨在探讨TGF-β1诱导的角膜纤维化细胞模型中,长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)LINC00963调控角膜纤维化瘢痕形成的作用和机制。方法:本研究的研究对象为人角膜基质细胞系,参阅最新的文献,采用2 ng/mL的TGF-β1以特定的时间梯度给药刺激构建角膜纤维化瘢痕的细胞模型;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)从mRNA水平检测角膜纤维化的特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)的表达水平,以表达水平的差异变化来验证模型是否构建成功;检测纤维化的角膜基质细胞对比正常角膜基质细胞LINC00963的差异表达;蛋白免疫印记实验(Western blot,WB)从蛋白水平检测α-SMA的表达;免疫荧光实验检测α-SMA的细胞定位和表达;构建LINC00963的过表达质粒,检测过表达LINC00963时对纤维化的影响,以此来验证LINC00963在抑制角膜纤维化瘢痕形成中的作用;生物信息学网站starBase预测LINC00963靶向的下游mi RNA,然后通过荧光素酶报告基因系统验证他们的相互作用关系。最后,设计并合成下游miRNA的激动剂(agomir)和抑制剂(antagomir),通过qRT-PCR和WB实验验证其在角膜纤维化瘢痕的作用。结果:(1)2 ng/mL的TGF-β1处理人角膜基质细胞24 h后,纤维化标志物α-SMA在mRNA和蛋白水平表达均升高,证明角膜纤维化的细胞模型构建成功。(2)在TGF-β1处理0 h、6 h、12 h及24 h后,LINC00963的表达量随着时间推移逐渐降低,说明在TGF-β1处理建立的角膜纤维化模型中LINC00963可能具有潜在的调控作用。(3)过表达LINC00963能逆转TGF-β1诱导的α-SMA表达的升高,证明了LINC00963可以抑制角膜纤维化。(4)生物信息学starBase网站预测到LINC00963存在与miR-143-3p种子区域的潜在结合位点,荧光素酶报告基因系统验证了他们的结合,说明LINC00963可能通过结合mi R-143-3p来发挥抑制作用。(6)在TGF-β1处理0 h、6 h、12 h及24 h后,miR-143-3p随着时间推移表达量逐渐升高,且过表达miR-143-3p可促进角膜基质细胞α-SMA的表达,敲低miR-143-3p会抑制α-SMA的表达,进一步证明了LIN00963通过结合miR-143-3p来达到抑制的目的。结论:在TGF-β1诱导的角膜基质细胞向肌成纤维细胞转分化的过程中,LINC00963表达下调,而过表达LINC00963可以抑制这种转分化,从而防止角膜纤维化瘢痕形成,证明LINC00963在角膜纤维化瘢痕的形成过程中起明显的抑制作用,其主要是通过靶向miR-143-3p来抑制miR-143-3p对角膜纤维化瘢痕的促进作用而发挥抑制作用的。