比率荧光探针定量检测生物样品中的甲基乙二醛

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生物体内存在过量的甲基乙二醛(MG)会引发一系列的疾病,其中糖尿病与MG的过量水平有着重要的关系,因此定量检测生物体内的MG浓度对糖尿病的研究具有重要意义。色谱分析方法包括HPLC,以及色谱-质谱方法的联用如LC-MS和GC-MS,均被用于检测MG的水平,然而它们需要昂贵的仪器和运行成本,并且样品制备往往需要长时间的衍生化处理。因此,开发一种简单、高效的检测方法具有重要意义。荧光探针具有优异的选择性、灵敏度和良好的生物成像功能被广泛用于生物样品的检测,其中比率荧光法以两个不同波长处荧光强度的比值作为响应信号以确定目标物浓度。由于不受环境影响因素的影响,其检测的准确性得到提高。本文使用比率荧光探针WHL45对生物样本中的MG进行特异性检测,主要展开了以下三方面的研究工作:(1)比率荧光探针定量方法的构建和动物血清中的MG浓度的检测。本文利用比率荧光探针WHL45对MG特异性识别的特点,综合考虑缓冲溶液中WHL45与MG反应的动力学参数,采用标准加入法确定MG的线性浓度范围,从而构建MG的定量检测方法。以胎牛血清(FBS)样品为实例,检验了该方法的可行性。(2)将WHL45应用于生物样品人体尿液和血浆中MG的定量检测。其中针对尿液样品,通过稀释样品来降低荧光背景、调节盐离子浓度来提高WHL45与MG的反应性。尿液中MG浓度定量结果为4.73±1.02 μM。针对血浆样品,通过三氯乙酸(TCA)去蛋白来去除基质干扰。血浆中的定量结果为:糖尿病和非糖尿病人血浆中MG浓度具有显著性差异(P<0.01)。(3)将WHL45应用于细胞内MG浓度的测定。一个血细胞样品分为两份,分别检测总的MG含量以及白细胞中MG的含量,从而计算出MG在白细胞和红细胞中的浓度分布。结果表明血细胞内含有MG,且主要存在于白细胞内,而非糖尿病和糖尿病人白细胞内的MG浓度具有显著性差异(P<0.01)。
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