不同条件下小鼠子宫内膜雌激素受体及HOXA10基因表达的研究

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在正常生殖发育过程中,胚胎着床是决定妊娠成功的关键。而胚胎着床是一个复杂的生理过程,它取决于容受状态的子宫内膜和具有侵入性胚胎的同步发育。子宫内膜容受性变化在胚胎着床过程中起到关键性作用。其中,雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)和HOXA-10基因在调节子宫内膜容受性方面起到重要作用。雌激素通过其受体调节子宫内膜的容受性,HOXA-10基因在生殖与胚胎着床、发育等方面有重要作用。与自然妊娠相比,体外受精-胚胎移植(IVF-ET)过程中存在多种因素的影响,同时,子宫内膜容受性在形成过程中受多种细胞因子、蛋白分子和基因的调控,这些特定调控因子在子宫内膜发育分化过程中呈现较为显著的时空表达特征,对内膜容受性形成有重要作用。为进一步提高动物体外受精-胚胎移植妊娠率,本研究从ER分布的角度,利用免疫组化法检测了不同条件处理的小鼠雌激素受体在小鼠发情周期子宫内膜中的表达规律,探讨不同时期ER受体在小鼠子宫内膜上的分布表达是否存在有差异,结合分析ER的相应分布与胚胎在子宫着床的窗口期是否一致,探讨ER对小鼠子宫窗口期着床和子宫内膜容受性变化的调节作用。同时,采用实时荧光定量PCR(Real-time qPCR, RT-qPCR)法分别检测不同处理条件下各组小鼠子宫内膜上HOXA-10基因表达,观察在人工注射超排激素、有无胚胎存在等因素下对HOXA-10基因表达的影响,进而探讨这些因素对子宫内膜容受性的作用。为探讨雌激素对小鼠子宫容受性的影响,实现主动干预子宫内膜容受性、提高IVF-ET的成功率。本研究利用免疫组织化学法检测了ER在小鼠发情周期子宫内膜中的表达规律。将36只同日龄雌鼠,根据处理方式的不同随机分为3组:自然发情受孕组、自然发情假孕组(对照组)和超数排卵组,3组小鼠在见栓后第2、4、6、8天分别取子宫样,采用免疫组织化学法,对不同处理组小鼠子宫内膜雌激素受体不同时期的表达进行定位和半定量研究,观察小鼠子宫内膜中ER的分布变化情况。免疫组化法检测结果显示,自然发情受孕组、自然发情假孕组(对照组)和超数排卵组小鼠在见栓后第2天,子宫内膜上ER表达量3组之间差异不显著(P>0.05);之后的第4、6、8天,超数排卵组雌激素受体表达量显著高于其他2组(P<0.05);自然发情受孕组小鼠子宫内膜中ER的表达在第4、6天时显著高于自然发情假孕组(P<0.05),在第8天时,自然发情受孕组小鼠子宫内膜中的ER阳性率与自然发情假孕组差异不显著(P>0.05)。与自然发情受孕组相比,自然发情假孕组和超数排卵组小鼠子宫内膜容受性下降,窗口期开放延迟,而自然发情假孕组和超数排卵组差异不明显(P>0.05)。通过测定在自然发情受孕组和超数排卵组中小鼠子宫HOXA-10基因表达量的不同,探讨在人工注射超排激素、有无胚胎存在等因素下对HOXA-10基因表达的影响。将生长发育均匀、一致性较好的实验小鼠随机分成3组:自然发情受孕组、自然发情假孕组(对照组)和超数排卵组,3组小鼠在见栓后第2、4、6、8天分别取其子宫样,采用SYBR Green I RT-qPCR检测方法,分别对3组不同处理条件下小鼠子宫内膜上HOXA-10基因表达量的变化情况进行检测,并进行两组间的比较分析。荧光定量PCR法检测结果显示,HOXA-10基因在超数排卵组和妊娠组小鼠的子宫内膜上均有表达,但两组在表达时间和表达量上存在差异。自然发情受孕组和超数排卵组的小鼠,在发情周期子宫内膜HOXA-10基因表达均呈阳性,在妊娠第2天以后表达强度呈现增加趋势,第6天以后逐渐下降;与自然发情假孕组小鼠比较,自然发情受孕组和超数排卵组小鼠子宫内膜HOXA-10基因表达强度均有所增加,但增加幅度不同。自然发情受孕组在妊娠后第2-6天,表达量和峰值均高于超数排卵组。表明自然发情受孕组和超数排卵组小鼠子宫内膜HOXA-10基因的表达规律,与小鼠子宫着床窗口期基本保持一致。
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