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为了构建一个高效的人胰岛素基因乳腺特异性表达载体，从而为利用动物乳腺生产人胰岛素打下基础，我们利用LongPCR技术克隆了长为6.7kb的山羊β酪蛋白基因5调控区，并且在克隆出人胰岛素基因的基础上，以奶牛β酪蛋白调控区为指导元件，以绿色荧光蛋白基因(EGFP)为报告基因，构了人胰岛素基因的乳腺特异性表达载体pBI-GFP，为利用动物乳腺生物反应器生产人胰岛素的研究打下了坚实的基础。相关研究结果如下：
1.通过LongPCR技术成功从人基因组中扩增出长度为1.6kb人胰岛素基因，其中包含有完整的编码序列。序列分析表明，片段与GenBank中登陆的人胰岛素基因DNA序列的同源性为99％，有三处发生了硷基突变，这并没有改变蛋白的功能
2.根据表达载体pEGFP-C1上的多克隆位点以及质粒pBL重的CSN2启动子序列重新设计引物，在INS的两端添加NheI和BamHⅠ酶切位点，采用定向克隆的方法，成功的将INS基因与CSN2调控序列融合在一起。
3.采用定向克隆的方法，利用真核表达载体pEGFP-C1构建了含有报告基因的人胰岛素乳腺表达载体pBI-GFP。
4.采用LongPCR法，分两段克隆了山羊CSN2基因长为6.7kb的5调控区。构建了乳腺表达载体pGGC6.7-GFP。
5.脂质体法将pGGC6.7-GFP转染体外培养的乳腺上皮细胞，经G418初步筛选，通过荧光显微镜观察到报告基因绿色荧光蛋白的表达。结果显示，本实验所克隆的山羊CSN25调控区具有启动子的活性。可以以此为基础构建高效的乳腺特异性表达载体。