【摘 要】
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通过对本实验室构建的西瓜噬酸菌的Tn5插入突变体库进行筛选,从中获得2株致病性丧失、群体感应信号增强、胞外多糖的产量下降并丧失烟草过敏性反应的菌株,分别为166和167。进
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通过对本实验室构建的西瓜噬酸菌的Tn5插入突变体库进行筛选,从中获得2株致病性丧失、群体感应信号增强、胞外多糖的产量下降并丧失烟草过敏性反应的菌株,分别为166和167。进一步通过亚克隆技术,获得了这2株菌株的Tn5插入位置,其插入基因分别为Aave-3192和Aave-2108,这两个基因分别编码Hypothetical protein和Methyl-accepting chemotaxis sensory transducer。通过基因互补的方法构建插入突变菌株的互补菌株,互补菌株的生物学测定结果表明,互补菌株的致病能力恢复,游动性,群体感应能力,胞外多糖的产量,生物膜的形成能力等功能也部分恢复,证明这两个基因都与西瓜噬酸菌的致病性相关。已有研究表明,西瓜噬酸菌存在遗传分化,目前将西瓜噬酸菌分为两个亚群,这两个亚群的菌株在生物学特性方面存在较大的差异。本研究通过西瓜噬酸菌全基因组序列,设计16对菌毛基因引物,并进行PCR扩增,结果表明,有4对引物只能扩增出亚群Ⅱ菌株菌毛基因;于是,对其中的两个菌毛基因Aave-4679 (pilA)和Aave-2716 (pill)进行定点突变,探讨其功能,结果表明,菌毛基因pilA缺失后病菌的致病性下降,生物膜形成能力下降,游动性减弱,群体感应丧失,NA培养基上菌落形态发生变化,无菌裙产生,但有烟草过敏反应;而pill基因缺失后病菌的游动性下降,在NA培养基上菌落形态上较野生菌菌裙宽度变窄,而致病性、生物膜的形成能力等生物学特性与野生菌株一致。实验结果证明了pilA与西瓜噬酸菌的致病性有关,而pill与致病性无关。
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