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目的:检测OLP患者外周血T细胞亚群,分析患者免疫状态。对OLP患者外周血T淋巴细胞进行分选并进行后期培养,分析T细胞体外培养状态。从OLP患者组织活检标本中进行T淋巴细胞试分选,了解组织块中T细胞分选的基本步骤。方法:OLP外周血T细胞亚群分析:抽取扁平苔藓患者静脉血2ml,经抗体标记及溶血后上流式细胞仪检测,同时行对照组操作。OLP病人外周血中T淋巴细胞分选及体外培养:外周血通过密度梯度离心和免疫磁珠特异性分选,获得T淋巴细胞,加入流式抗体,检测其分选后T淋巴细胞纯度,并监测T淋巴细胞体外培养中凋亡状态,镜下观察生长状态并绘制生长曲线。OLP口腔活检组织标本中T淋巴细胞分选:临床扁平苔藓组织标本通过中性蛋白酶冷消化,去除上皮层后,将暴露基底膜区的组织块继续行后期处理后,加入流式抗体,流式细胞仪检测T淋巴细胞比例。结果:OLP外周血T细胞亚群分析:OLP患者组外周血中CD8+T与正常对照组外周血相比有明显升高(P＜0.001),CD4+T/CD8+T比值明显降低(P＜0.001),CD4+T患者组比正常对照组也有降低但无显著性差异(P＞0.05)。OLP病人外周血中T淋巴细胞分选及体外培养:T细胞分选后纯度达到97.2%,并在3天后纯度进一步升高为97.7%。分选后T细胞体外培养中显微镜观察见T细胞为小圆形,透光性好,位于培养皿底。后期形成肉眼可见的由几十到几百细胞组成、直径可达30～100um甚至更大的细胞团。晚期细胞增殖分裂能力下降,细胞团块分解散开细胞死亡,死亡细胞可见细胞膜骤缩明显。OLP T淋巴细胞的生长曲线基本呈“S”型,对数生长期为第2～3d(约48h),以后进入平台期,传代周期约4～6d,淋巴细胞体外培养可至第3-4代。T淋巴细体外培养中细胞凋亡检测显示,传代培养第3天,功能健康细胞为70.9%,19.4%的OLP T淋巴细胞处于早期凋亡状态,1.2%为早期坏死细胞,8.5%为晚期凋亡和坏死细胞。OLP T淋巴细胞传代培养第7天,活细胞为48.3%,31.2%的细胞处于早期凋亡状态,2.3%早期坏死,18.2%为晚期凋亡和坏死细胞。OLP口腔活检组织标本中T淋巴细胞分选:未得到理想结果,操作后剩余细胞总量少,流式细胞仪检测其中T淋巴细胞比例为6.48%,其中CD4+T为3.3%,CD8+T为3.18%,即可获得T细胞量为5*10~4。初步分选后细胞量不足及分选后细胞杂乱,T细胞比例小都为后期操作和检测带来困难。结论:1 OLP患者外周血T细胞亚群分析表明OLP患者CD8+T细胞上升,即T抑制细胞、T杀伤细胞功能偏亢进,导致CD4+/CD8+比值下降,显示OLP患者体内细胞免疫功能处于失衡状态。2从OLP外周血中分离出高纯度及高活力的T淋巴细胞,并可成功进行体外培养20天,但随着体外培养时间增加细胞活力减低,细胞凋亡增加。建议T细胞在后续免疫共建中应在早期3天左右,即行淋巴细胞和上皮细胞的免疫共培养,以避免因体外培养时间过长所致凋亡增加影响其特异代表性。3组织块中T淋巴细胞试分选尚未达到后期继续实验要求,主要是原因是组织量少,且T细胞在组织中为浸润分布,因此不易全部提取,加上操作步骤多带来细胞量上的损失和细胞活力的降低,都为后期实验操作和分析带来很大困难,实验条件还需要继续摸索。