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高水平的多药耐药性（multidrug resistance,MDR）基因在肿瘤细胞中过量表达是使肿瘤细胞耐药的内在原因,也是导致肿瘤化疗失败的主要因素。寻求一种抑制MDR活性的抑制剂是提升抗肿瘤药物药效的重要途径。P-糖蛋白（P-gp）基因属于多药耐药基因家族中的一员,是一类依赖ATP的药物分子泵,它能将胞内的药物通过主动运输泵至胞外。同时,P-糖蛋白也是抗MDR的重要药用靶标蛋白。目前,已经开发了三代P-糖蛋白抑制剂,但因其细胞毒性等作用而被限制限制临床应用。因此,研究高效低毒的P-糖蛋白抑制剂将有助于克服肿瘤细胞耐药的临床应用。本论文通过内盐法MTS法（建模、细胞毒性、体外逆转倍数）对菌株次级代谢产物进行评价,明确活性菌株;通过实时定量PCR（q PCR）法和Western blot法分析活性菌株次级代谢产物逆转人乳腺癌耐药细胞的相关基因的表达模式以初步探究其作用分子机制。具体结果如下:1.真菌代谢产物逆转肿瘤MDR的活性菌株的筛选构建人乳腺癌（MCF-7）阿霉素（ADM）耐药细胞株（MCF-7/ADM）模型。采用低浓度持续诱导法建立人乳腺癌耐药细胞株,耐药性测定发现,人乳腺癌细胞和耐药细胞对阿霉素的IC50值分别为19.453、99.39,耐药指数RI为5.11,此外,研究还发现耐药细胞株对紫杉醇和顺铂也产生了耐药性。观察细胞形态发现,经过药物诱导的细胞其形态与正常细胞相比明显发生变化。进一步对所建立的细胞进行完整评价发现,经过药物诱导后耐药细胞中多药耐药基因ABCB1、ABCG2、ABCC1、ABCC2、ABCC4、ABCC6、ATM和CYP1A1的表达显著上调,此外,通过检测P-糖蛋白的表达量发现,耐药细胞的P-糖蛋白的蛋白表达量显著上调。由此表明,本研究已成功构建P-糖蛋白过表达的人乳腺癌耐药细胞系。测定真菌代谢产物的细胞毒性。为了排除从次级代谢产物中筛选获得的P-糖蛋白抑制剂提高化疗药物毒性不是因为抑制剂本身毒性的叠加,首先,对候选真菌进行了细胞毒性测试。采用内盐法（MTS）法检测66株菌株次级代谢产物细胞毒性实验发现,所有菌株代谢产物的药物浓度在100μg·m L-1具有低细胞毒性,其IC50值均高于100μg·m L-1。由此表明,66个菌株的代谢产物均具有低细胞毒性,可以进行下一步的筛选。真菌代谢产物逆转肿瘤多药耐药性的筛选。通过内盐法MTS法检测代谢产物的体外逆转倍数,发现66株菌株中仅有4株具有较好的多药耐药逆转活性,即红棕毛筒腔菌Tubeufia rubra PF02-2、Cladosporium sp 02R2A、Nemania dendrobii S7S1A、Colletotrichum watphraense 03S2A,其逆转倍数分别为3.79、3.04、3.04、3.29。2.活性菌株作用机制的初步研究为探究真菌次级代谢产物逆转多药耐药细胞活性的可能机制。用次级代谢产物处理前/后的耐药细胞株系,在转录水平上检测相关多药耐药基因（ABCB1、ABCC1、ABCC3、ABCC4、ABCG2、CYP1A1）的表达模式。结果发现,用PF02-2次级代谢产物(90μg·m L-1)处理后,导致ABCB1、ABCG2、ABCC3、ABCC4和CYP1A1的表达下调,ABCC1表达上调;在20μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCG2、ABCC3、ABCC4的表达下调,ABCC1、CYP1A1表达上调。用02R2A次级代谢产物处理发现,在90μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCC1、ABCC3、CYP1A1表达显著下调,ABCG2和ABCC4表达上调;在20μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCG2、ABCC1、ABCC3、ABCC4和CYP1A1表达下调。用03S2A次级代谢产物处理发现,在90μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCG2、ABCC1、ABCC4表达显著下调,ABCC3表达上调;在20μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCC3表达下调,ABCG、ABCC4无显著性差异,ABCC1、CYP1A1表达上调。用S7S1A处理发现,在90μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCC3、CPY1A1表达下调,ABCC4、ABCG表达上调,ABCC4无显著性差异;在20μg·m L-1条件下,ABCB1、ABCC4、ABCC3表达显著性下调,ABCG表达上调,ABCC1、CYP1A1无显著性差异。在蛋白水平上,利用Western blot检测用次级代谢产物处理前/后的耐药细胞株系胞内P-gp的蛋白表达水平发现,所有活性菌株的次级代谢产物在20μg·m L-1条件下均能显著性的降低耐药细胞胞内的P-gp的蛋白表达水平,但在90μg·m L-1条件下虽降低了P-gp的蛋白表达水平,但并不显著。该结果进一步验证了上述推测。综合上述结果发现,所有的活性菌株次级代谢产物在不同浓度条下,均对ABCB1（P-gp）基因具有不同程度的抑制表达作用,表明这些次级代谢产物中均具有抑制P-gp活性的物质。由此推测,活性菌株次级代谢产物通过抑制包括P-gp基因在内的多个相关多药耐药相关基因的表达模式,减少药物外排量,从而逆转肿瘤细胞多药耐药性。