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背景MicroRNA(miRNA)由17~23个核苷酸(nt)构成,调节靶基因转录。miRNA靶向结合mRNA 3′-uTR(非编码碱基域),实现对mRNA直接降解,或者间接抑制。而miRNA的成员miRNA-9-5p,参与肿瘤的生物学过程。但在食管鳞癌中miRNA-9-5p的运作机制还没有完全明确。我们通过观察miRNA-9-5p和Notch2对食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞靶向调控,提供了食管癌诊疗的新思路。目的探讨miRNA-9-5p通过靶向调控Notch 2对ESCC增殖、侵袭、迁移的影响。方法1.RT-PCR检测miRNA-9-5p在50例食管鳞癌组织、病人血清和食管鳞癌细胞株TE-1、ECA109、KYSE410及人正常食管上皮细胞株HEEC中的表达。2.构建miRNA-9-5p过表达的KYSE410细胞株,采用MTT法、Transwell小室实验,分别检测miRNA-9-5p过表达对KYSE410细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。3.RT-PCR检测食管癌组织Notch2 mRNA的表达,RT-PCR和Western blot检测食管癌细胞中Notch2 mRNA和蛋白的表达。4.采用生物信息学预测,利用双荧光素酶报告基因实验,检验miRNA-9-5p和Notch2的靶向关系,RT-PCR和Western blot检测miR-9-5p和Notch2的调控关系。5.在miRNA-9-5p过表达的KYSE410细胞中转染pcDNA3.0-Notch2过表达载体质粒后,观察上调Notch2对miRNA-9-5p过表达的KYSE410细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果1.miRNA-9-5p在食管鳞癌组织和血清中的表达水平,明显低于正常对照组(P<0.05),而Notch2 mRNA在食管鳞癌组织中的表达,明显高于正常对照组(P<0.05)。2.相关性分析结果显示,食管鳞癌组织中miRNA-9-5p与Notch2的表达呈负相关。3.与HEEC细胞相比,TE-1、ECA109和KYSE410细胞中miRNA-9-5p的表达均明显降低,而Notch2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05),且KYSE410细胞变化最为显著。4.miRNA-9-5p过表达能够明显抑制KYSE410细胞增殖、迁移和侵袭能力。5.双荧光素酶基因实验检测结果证实Notch2是miRNA-9-5p的靶基因,RT-PCR和Western blot检测结果显示,miRNA-9-5p可负向调控Notch2表达。6.上调Notch2表达能够明显促进miRNA-9-5p高表达的KYSE410细胞的增殖、侵袭和迁移。结论1.miR-9-5p和Notch2有靶向调控关系。2.miR-9-5p通过靶向调控Notch2抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭。