关节软骨损伤后有限的自身修复能力及其对人体功能的严重影响，使其成为骨科基础和临床研究中的热点和难点课题。近十几年来，组织工程方法为软骨修复提供了新的途径，并已取得了一定进展，但仍有很多问题亟待解决。本课题就是根据这种需求，在软骨细胞培养的基础上，制备柱形藻酸钙载体并复合兔关节软骨细胞进行体外培养、体内异位成软骨及修复兔膝关节软骨缺损的实验研究，为软骨组织工程的进一步研究提供实验依据。 1．兔关节软骨细胞体外培养 目的：掌握细胞培养方法，观察兔关节软骨细胞体外生长情况，为组织工程软骨的研究提供种子细胞和相关技术支持。方法：酶消化法分离幼兔关节软骨细胞，进行原代及传代培养，观察细胞形态变化及体外生长增殖情况。结果：原代细胞经培养3天后进入对数生长期，6代之内细胞形态及功能良好，以3～5代细胞生长活力最为旺盛。未经传代连续培养3wk的细胞，形态趋向于成纤维细胞，但胞外基质分泌明显，甲苯胺蓝染色阳性。结论：兔关节软骨细胞增殖快，生长稳定，可作为软骨组织工程的种子细胞。 2．藻酸钙柱形载体的制备及复合细胞前后的结构观察 目的：制备新型细胞载体，为组织工程研究提供材料支持。方法：藻酸钠溶液与葡萄糖酸钙溶液以不同比例混合均匀，置特殊模具中，经冷冻、脱水等 第四罕医大学博士学位 文 处圳获得杜形藻酸钙载体村料。以其复合兔片竹软忖驯胞，斤对衬本IV介汕胞 前后的结构进行纵织学和扫描电镜观察。结果：藻酸钙具何厂放0W网抢状g．‘巾J， 网眼呛上1！。＂j见人小小等的微几，网！IR中IIJ吸咐·定贝JIu兔片u软刀邻fi地。f．’i 论：经初步观察，藻酸钙DZ形材料可试用作兔关曹软骨驯胞的8划个，Q介则胞 进行软骨组织＿卜程的研究。 3．藻酸钙－软骨细胞复合物植入兔背肌成软骨的实验研究 R的：通过观察关节软骨纲胞复合干载体后莉下州叼J物休内刑）十卜］的州 及成软骨惰况，为组织丁程方法修复关节软骨缺损的研究捉供进 步的实验伙 排。方法：将藻酸钙载体复合兔关节软骨细胞，手术植入兔背剖汕KQ内，汁训 厂术后 ZWk、4Wb 时取材进行组织学观察。结果：软骨绷胞n｛FjJ种动物f个内进 ·步’卜长增殖，4W卜卜1可见新生软骨织织形成。结论：藻酸例－－软们哪！胞V介物 Illl‘异体动物休内形成软骨组织，可川厂软骨织织卜程的研4乙 4．藻酸钙载体复合软骨细胞修复兔关节软骨缺损 目的：观察藻酸钙－软骨细胞复合物在兔股骨滑车关节币i个层软竹缺损修 复中的作用。方法：新西兰白兔共26只，取其中以）只，】’骸股关V们股竹附 车面造成直径0．3cm的全厚层关节软骨缺损，人侧为藻酸钙复合软什圳胞川， 植入藻酸钙－软骨细胞细胞复合物，右侧为单纯藻酸钙纠，枪入＜丫I藻刑叭5划A、 作为对照。另外6只，缺损处不加任何处理，作为标准宁门组。术们4wk、Hwk、 12Wb、24Wb、28Wb分别取材行组织学观察。结果：藻酸钙复合软骨绷胞纲形成 软骨组织修复：单纯藻酸钙组获得部分纤维性修复，完全空白织没行修复，缺 损底部方少V纤雏红织，医骁组