【摘 要】
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目的:应用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)系统,建立分离和纯化热休克蛋白70-多肽复合物(heat shock protein 70-polypeptide complexes,HSP70-P
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目的:应用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)系统,建立分离和纯化热休克蛋白70-多肽复合物(heat shock protein 70-polypeptide complexes,HSP70-PCs)的方法,并观察其负载树突状细胞(dendritic cell,DC)的抗肿瘤免疫保护效应。方法:采用DEAE-Sepharose离子交换层析和ADP-Agarose亲和层析,从热处理的BALB/c鼠源性结肠癌细胞(CT26)裂解液中分离、纯化HSP70-PCs。所得蛋白经不连续SDS-聚丙烯酰胺电泳及Western-blotting进行蛋白分子量及性质鉴定,Bradford法测定蛋白的得率。用提纯的HSP70-PCs负载BALB/c小鼠骨髓来源的DC,观察DC诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对肿瘤细胞的杀伤活性;并将DC接种于荷瘤小鼠皮下,观察其对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠生存期的影响。结果:纯化蛋白经鉴定为分子量70KD的HSP70-PCs;平均1克湿重肿瘤细胞获得63.63μg的HSP70-PCs;HSP70-PCs负载DC诱导的CTL对CT26肿瘤细胞具有特异性杀伤作用;用其进行治疗能明显抑制小鼠肿瘤的生长,并能显著延长荷瘤小鼠的生存时间。结论:用上述层析法可分离出较高纯度的HSP70-PCs,将其负载DC后对结肠癌小鼠具有显著的治疗效果。
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