紫金龙为罂粟科紫金龙属植物紫金龙Dactylicapnos scandens (D. Don) Hutch.的干燥根,是我国云南省民间传统习用中草药,主要产自云南、四川西南部、广西西部和西藏东南部。紫金龙味苦、辛,性凉,有毒,有镇痛、止血、消炎、降压之功效,主治神经性头痛,牙痛,胃痛,风湿关节痛等各种痛证,跌打损伤,外伤出血,产后出血不止,崩漏下血及高血压等。紫金龙是白族地区发掘出来的具有显著镇痛作用的民间草药,曾被《中国药典》1977年版收载。紫金龙的主要化学成分是生物碱类,其中以异紫堇定碱(isocorydine, ICD)和原阿片碱(protopine, PTP)含量最高,其盐酸盐收率分别占生药的5.2%和1.4%。紫堇定碱具有解痉、舒张血管、抗疟原虫和抗心律不齐等多种药理作用；原阿片碱具有解痉镇痛、抗血栓、抗炎、抗胆碱、抗组胺等多种作用。而异紫堇定碱的药物代谢动力学和转运性质,以及原阿片碱的转运性质仍然末见报道。此外,紫金龙在生物体内的ADME’性质依然未知。因此,为了更深入的了解紫金龙,为紫金龙的开发利用提供理论依据和临床参考,本课题拟对紫金龙的两种主要生物碱成分异紫堇定碱和原阿片碱展开体内外药物代谢动力学研究及转运研究。1.异紫堇定碱在大鼠肝微粒体中的代谢研究异紫堇定碱可由CYPs酶介导发生Ⅰ相氧化代谢,但其不能发生Ⅱ相代谢。在大鼠肝微粒体的化学抑制剂实验和大鼠体内肝药酶诱导实验证明CYP3A2是介导异紫堇定碱在大鼠肝代谢主要酶亚型。异紫堇定碱对CYP1A1/2、CYP2C6、 CYP2C11、CYP2D1、CYP2E1和CYP3A2没有抑制作用。使用高分辨质谱(HRMS)初步分析了异紫堇定碱在大鼠肝微粒体中的代谢物。异紫堇定碱经大鼠肝药酶代谢可发生去甲基和羟基化反应,生成三种代谢物(两个去甲基代谢物和一个羟基化代谢物)。2.异紫堇定碱在人肝微粒体、人重组酶和HepG2细胞中的代谢研究通过人肝微粒体代谢酶表征实验和人重组酶共孵育实验发现,CYP2C8,2C9,2C19和CYP3A4共同介导了异紫堇定碱的代谢。异紫堇定碱对CYP2C8有较弱的抑制作用,对CYP1A2.2C9、2C19、2D6、2E1和3A4均无抑制作用。异紫堇定碱和原阿片碱对HepG2细胞的毒性都很小,200μmol/L浓度下暴露24h,HepG2细胞存活率皆>90%,提示异紫堇定碱和原阿片碱对HepG2细胞没有明显的细胞毒性。报告基因法显示,10μmol/L的异紫堇定碱对CYP2B6、CYP3A4和UGT1A1均无诱导作用。3.异紫堇定碱和原阿片碱在MDR1、BCRP和OCT1转基因细胞上的摄取与转运研究采用MDCK-MDR1、LLC-PK1-BCRP和MDCK-OCT1等几种细胞作为模拟小肠(MDCK-MDR1、LLC-PK1-BCRP和MDCK-OCT1)或血脑屏障(MDCK-MDR1和LLC-PK1-BCRP)的体外模型,研究了异紫堇定碱和原阿片碱在这几种细胞中的转运机制以及对P-gp功能的影响。结果表明异紫堇定碱和原阿片碱均非外排转运体P-gp和BCRP和的底物,提示这两种生物碱可能具有较好的口服吸收,并可能会透过血脑屏障进入脑部；同时它们也不是摄取转运体OCT1的底物,表明异紫堇定碱和原阿片碱不能由OCT1摄取进入细胞内。4.异紫堇定碱在大鼠体内的药物动力学和组织分布研究以延胡索乙素作为内标,MRM模式检测,建立了测定大鼠血浆和组织样品中异紫堇定碱的LC-MS/MS(?)(?)。该方法具有操作简便、灵敏度高、稳定性、重复性好等优点,以乙醚/二氯甲烷作为提取溶剂,甲醇-水复溶,不存在明显的基质效应。药物动力学研究表明,异紫堇定碱作为一种口服镇痛剂,具有速效、短效的特点。异紫堇定碱在大鼠中的药物动力学行为基本没有性别差异。组织分布研究表明异紫堇定碱可在大鼠体内快速而广泛的分布到各组织中,而且可以透过血脑屏障进入脑部。5.紫金龙在大鼠体内的药物动力学、组织分布和排泄研究建立了快速、准确、高灵敏的LC-MS/MS法以测定生物基质中的异紫堇定碱和原阿片碱,并将此方法成功应用于紫金龙提取物在大鼠体内的药物动力学、组织分布和排泄研究。药物动力学研究表明,紫金龙中的异紫堇定碱和原阿片碱皆能迅速达到其峰浓度且较快的消除,具有速效、短效的特点。两种生物碱都具有较好的口服生物利用度。组织分布研究表明紫金龙中的异紫堇定碱和原阿片碱都可以快速而广泛的分布到各组织中。相对其他组织,其在消化道胃和小肠中的滞留时间更长。两种生物碱都可以透过血脑屏障进入脑中,且在脑部八种脑区的分布无特异性,各脑区之间的药动学参数十分接近。排泄研究显示,紫金龙中的异紫堇定碱和原阿片碱在尿液、粪便和胆汁中的浓度很低,这说明两种生物碱都主要以其代谢物形式排泄。