目的:近20年来,我国甲状腺癌的发病率呈现明显增加趋势,年均增长约6.2%。据《2012中国肿瘤登记年报》报道,在全国肿瘤登记地区中,甲状腺癌的发病率占据第10位,为6.54/10万;而在女性中占据第8位,达10.09/10万;男女发病比为1:3.2。甲状腺癌中90%以上的为分化型甲状腺癌(DTC),而其中甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是其中最为常见的病理类型[1]。目前对于PTC的治疗外科手术最为重要,内分泌治疗和放射性I131治疗也非常关键。其中术后内分泌治疗对降低甲状腺癌的复发和转移也不容忽视。有研究表明TTF-1为分子量为38kd的DNA结合蛋白,属于转录因子家族中的一员,在甲状腺生长发育过程中起重要作用,因特异性蛋白的基因启动子或增强子区域有TTF-1的结合位点,对甲状腺特异性基因(如Tg、TPO、TSHR和NIS)的转录具有调控作用。Pax-8也属于转录因子家族中的一员,该基因表达一种核蛋白,调节甲状腺滤泡细胞的生长、终末分化及甲状腺特异基因的表达。细胞特异性基因的转录通常都依赖于一系列的细胞的特异性转录因子,如甲状腺特异性转录因子1(Thyroid transcriptionfactor-1,TTF-1)和成框基因8编码的转录因子(Paired—domaintranscription factor,Pax-8)等。TSHR是G蛋白偶联受体超家庭中的一员,由αβ两条多肽链亚基组成的大分子蛋白质,其主要存在于甲状腺滤泡细胞膜上,是TSH主要的作用部位。相关研究表明TSHR的表达随着甲状腺组织的分化程度的降低而降低。TSH与细胞表面的TSHR结合后,与细胞表面的G蛋白的α亚基发生偶联,通过G蛋白介导激活c AMP(腺苷酸环化酶),从而使胞内c AMP升高,c AMP进一步激活PKA(蛋白激酶A),PKA活化后激活核内的特异性转录因子,如TTF-1(甲状腺特异性转录因子-1)、TTF-2(甲状腺特异性转录因子-2)、Pax-8(成框基因8)或使其磷酸化,从而发挥调节甲状腺的功能,进一步影响甲状腺细胞表面特异性受体的表达,如TG、TPO、TSHR、NIS等。所以研究甲状腺转录因子可间接反映TSHR的数量及活性的表达。目前对于TSHR在甲状腺癌的表达研究较多,结果不甚一致,对其转录因子的研究鲜有报到,而且TTF-1、Pax-8在甲状腺良、恶性肿瘤中的表达定位及差异性仍存争议。转录因子(TTF-1,Pax-8)与TSHR的关系研究国内尚未涉及。本课题通过免疫组化SP法观察甲状腺乳头状腺癌(PTC)组织及结节性甲状腺肿(NG)组织中TTF-1、Pax-8与TSHR的表达情况,并对TTF-1、Pax-8与TSHR的相关性进行研究,为甲状腺乳头状腺癌发生发展、诊断及治疗疗效提供理论依据。方法:本实验收集了河北医科大学附属第二医院东院区腺体外科自2014年08月至2016年07月外科手术切除的甲状腺组织标本98例,包括甲状腺乳头状癌56例,结节性甲状腺肿42例。所有甲状腺癌患者术前均未经过放,化疗。分化型甲状腺癌按标准国际抗癌联盟制定的TNM分期,分为I期38例,II期2例,III期11例,IV期5例。有淋巴结转移的38例,无淋巴结转移的18例。所有组织均取4μm厚度的连续切片7张,其中1张切片常规HE染色进行病理形态学观察,其余6张分别用于TTF-1、Pax-8及TSHR的免疫组织化学染色及阴性对照。采用SP法检测TTF-1、Pax-8及TSHR在甲状腺乳头状癌及结节性甲状腺肿的表达情况,并结合临床资料进行分析。应用SPSS统计软件采用卡方检验,非参数秩合检验和秩相关等统计方法对数据进行分析。检验标准为P<0.05有统计学意义。结果:1 TTF-1在甲状腺组织中表达部位为细胞核。甲状腺乳头状癌(PTC)、结节性甲状腺肿(NG)组织中的TTF-1阳性表达分别80.4%和95.2%,结节性甲状腺中的阳性率高于甲状腺乳头状癌,对TTF-1进行Wilcoxon W检验在两者中的阳性及强阳性表达差异无统计学意义(Z=-0.892,P=0.372,P>0.05)。I/II甲状腺乳头状癌组比III/IV甲状腺乳头状癌有更高的比例,差异有统计学意义(P<0.05),说明TTF-1的减少,临床预后越差。此外我们还研究其在其他病理学参数,如淋巴转移、肿瘤大小、患者性别、年龄与TTF-1的关系,均无统计学意义。不能认为TTF-1的表达与这些因素有关。(见表1-6)2 Pax-8在甲状腺细胞的表达为细胞核和(或)细胞浆。在两组病例中均有表达,但表达形式存在显著差异:在PTC中主要为细胞核浆共表达,且差异有统计学意义(Z=-5.689,P=0.000,P<0.01);在NG中主要表达于细胞核,差异也具有统计学意义(Z=-6.256,P=0.000,P<0.01)。(见表7-9)3 TSHR在甲状腺肿细胞中主要表达细胞膜的基底侧;此外甲状腺乳头状癌细胞的胞浆也有少量表达。但甲状腺乳头状癌组织的着色强度小于结节性甲状腺组织。在56例PTC组织中阳性率为83.9%,其中阳性和强阳性率为48.2%;42例结节性甲状腺肿中阳性率为100%,阳性和强阳性率占85.7%;对两组数据进行Wilcoxon W检验有统计学意义,可以认为结节性甲状腺肿的TSH受体表达高于甲状腺乳头状癌。TNM分期:Ⅰ/Ⅱ期阳性占比36/40,阳性表达率为90.0%;Ⅲ期/Ⅳ期阳性占比11/16,阳性表达率为68.8%。阳性表达率随分期程度的增高,呈下降趋势,运用Wilcoxon W检验,TSHR表达水平与临床分析的差异有统计学意义,可以认为TSHR的表达水平越低,临床预后越差。此外,还对比了淋巴转移,患者性别,肿瘤大小、年龄与TSHR的关系,均无统计学意义。不能认为TSH受体表达与这些因素有关。(见表10-15)4对TTF-1与TSHR在甲状腺乳头状癌中的表达进行Spearman相关性分析,TTF-1的表达量变化与TSHR的表达变化呈正相关(r=0.520,P=0.000),即在TTF-1在甲状腺乳头状癌组织中的表达下降的时候,TSHR的表达亦随之下降。在结节性甲状腺肿内二者也存在正相关性(r=0.649,P=0.000)。对Pax-8与TSHR在甲状腺乳头状癌中胞核胞浆共表达进行Spearman相关性分析P=0.069,按α=0.05水准,P>0.05,尚不能认为在甲状腺乳头状癌中Pax-8与TSHR的表达具有相关性。(见表16-19)结论:1 TTF-l在甲状腺良恶性病变组织中均可较好的表达,临床可检测TTF一1来正确判断肿瘤的来源。2 Pax-8在PTC主要共表达于细胞核和细胞浆,且具有良好的鉴别诊断价值,提示Pax-8有成为PTC诊断标记的潜在应用价值。3 PTC中TSHR表达从阴性到阳性均有分布,为内分泌治疗提供了理论依据,也为其临床指导治疗提供了帮助。4在PTC和NG组织中TTF-1与TSHR均具有较强的正相关性,为内分泌治疗提供理论依据。