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第一章VB1对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和凋亡的影响目的：探讨VB1单药和联合5-FU用药对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和凋亡的影响。方法：1.建立人绒毛膜癌JEG-3细胞培养体系。2.用细胞增殖抑制实验(MTT法)检测细胞增殖：VB1单药：0.1,0.5,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0μmol/L共7个浓度梯度,并选择24,48,72h为3个时间梯度；5-FU单药：2.5,5.0,10.0,25.0,50.0,100.0,200.0μg/ml共7个浓度梯度,药物作用时间48h；VB1联合5-FU：将终浓度为5μmol/L VB1分别与不同浓度的5-FU共浴48h,对照组不加药,检测各组相对存活率,计算增殖抑制率。3.平板克隆形成实验检测不同药物处理后各组的克隆形成率。4.不同药物处理后,用Hoechst33258染色观察凋亡形态；流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果：1.不同浓度的VB1(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μ mol/L)分别作用JEG-3细胞后,结果显示随着VB1浓度和作用时间的增加,JEG-3细胞存活率减少(P<0.05)。24h、48h、72小时的IC50分别为13.537、5.170、1.926μmol/L。2.48h时5-FU的IC50为25.257μg/ml,与5μmol/L VB1合用时,IC50为4.078μg/ml,增效倍数为6.19倍。金氏公式计算q值均大于0.85,提示VBl与5-FU联用具有协同效应。3.不同浓度的VB1作用后,细胞的克隆形成率明显低于对照组。药物浓度越高,克隆形成率越低。VB1联合5-FU用药组的克隆形成率低于两种药物各自单独用药的克隆形成率(P<0.05)。4. Hoehest33258染色观察不同浓度的药物作用JEG-3细胞后,细胞核出现明显的凋亡的多种形态改变；流式细胞仪分析结果显示,各用药组的细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。VB1单独作用JEG-3细胞,凋亡率与药物的浓度正相关(P<0.05)。VB1(5μmol/L)与5-FU(25μg/ml)联合用药组的凋亡率与相同浓度的单独用药组相比均明显增高(P<0.05)。结论：1.VB1在一定的浓度范围内,可以明显抑制JEG-3绒癌细胞的增殖,作用效果是剂量-时间依赖的。2.VB1在一定的浓度范围内能够促进JEG-3绒癌细胞的凋亡,呈剂量依赖性。3.VB1与5-FU合用对JEG-3绒癌细胞的抗肿瘤效果是协同增强的。第二章VB1对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖抑制和诱导凋亡的机制的研究目的：初步探讨VB1对人绒毛膜癌细胞JEG-3抑制增殖和促进凋亡可能的机制。方法：1.RT-PCR检测各浓度组AKT、mTOR、P70S6K的mRNA的表达情况。2. Western blot检测各浓度组AKT、mTOR、P70S6K及相应磷酸化蛋白的表达情况。3. Western blot检测各浓度组凋亡相关蛋白的表达情况。结果：1.不同浓度VB1作用JEG-3细胞后AKT、mTOR、P70S6K mRNA的相对表达量均比对照组明显降低；并且在一定程度上呈现剂量依赖关系(P<0.05)。2. Western blot结果显示随着VB1作用浓度的升高,JEG-3细胞的AKT、mTOR、P70S6K及相应磷酸化蛋白的相对表达量均比对照组降低,不同浓度组各指标差异均具有显著性(P<0.05)。3.随着VB1作用浓度的升高,JEG-3细胞的pro-caspase-3的表达无明显变化,而cleaved-caspase-3逐渐增强,Bcl-2的表达则逐渐减弱,与对照组比较,差别具有显著性(P<0.05)。结论：VB1对人绒毛膜癌JEG-3细胞的抑制作用与mTOR信号通路相关,Caspase-3和Bcl-2家族的凋亡相关蛋白参与了VB1诱导JEG-3细胞凋亡的过程。第三章VB1对绒癌抗肿瘤作用的动物实验研究目的：建立人绒毛膜癌JEG-3细胞SCID鼠移植瘤模型,研究VB1单独及联合5-FU对荷瘤小鼠移植瘤的作用,并初步观察其毒副反应。方法：1.建立人绒毛膜癌JEG-3细胞SCID鼠移植瘤模型,观察肿瘤模型的生物学特性。2.用VB1单独及联合5-FU作用荷瘤小鼠后,观察测量小鼠肿瘤体积、重量的变化,检测血清β-HCG水平的变化；并通过检测血白细胞计数、骨髓涂片、肝酶变化、体重改变以了解其毒副反应。结果：1.成功建立人绒毛膜癌SCID小鼠移植瘤模型,移植瘤接种成功率为100%,成瘤均匀一致。2.VB1对人绒毛膜癌荷瘤SCID小鼠的的肿瘤生长有明显的抑制作用,随着药物浓度的增加,其体积抑瘤率、瘤重抑瘤率均明显增加(P<0.05)。VB1的高浓度组(80mg/kg)体积抑瘤率为76.65%,重量抑瘤率为46.56%。3.VB1联合5-FU用药组的体积抑瘤率和瘤重抑瘤率均比二者分别单独作用时明显增加(P<0.05),说明在动物模型体内,VBl可增强5-FU的抑瘤作用。4.用药后各组的血清β-HCG水平均明显低于对照组,P<0.05。VB1用药组β-HCG下降程度与药物浓度正相关,联合用药组β-HCG水平低于两药单独用药组,具有显著性差异,(P<0.05)。5.各用药组的外周血白细胞计数、血清ALT和AST结果与对照组相比无显著差异(P>0.05),提示VB1短期内对荷瘤小鼠的骨髓抑制作用、肝损害均不明显。结论：1.VB1对人绒毛膜癌JEG-3SCID小鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制作用。2.VB1联合5-FU可增强5-FU的动物模型体内抑瘤效果。3.VB1短期内对荷瘤小鼠的骨髓抑制作用、肝损害均不明显。