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目的:探讨构建FasL基因逆转录病毒转染猪软骨细胞的表达及其抑制同种异体移植免疫排斥反应的作用.方法:1、通过RT-PCR法克隆猪FasL基因,连入pGEM-T载体中测序鉴定,经酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pGCEN中,构建pGCEN-FasL逆转录病毒表达载体;2、pGCEN-FasL逆转录病毒经PA317包装,产生高滴度的病毒液,感染猪耳软骨细胞,经G41 8筛选获得抗性克隆.应用FACS和Western blot检测转染的软骨细胞FasL的表达,通过JAM试验测定FasL<'+>软骨细胞诱导Jurkat细胞、活化T细胞的凋亡率,证实其免疫生物学功能;3、在贵州香猪体内植入组织工程化FasL+软骨细胞及FasL-的软骨细胞,分别在软骨结节形成后的第2周、第3周取材.经组织病理和免疫组化染色,观察、检测新生的FasL<'+>软骨组织生长状况和免疫排斥的抑制.结果:1、经双酶切和测序鉴定,成功地克隆了猪FasL基因,并构建了pGCEN-FasL逆转录病毒表达载体.应用FACS检测经载体转染的软骨细胞FasL表达率达57％,Western blot显示在37kD处有一特异性蛋白条带.2、在体外,FasL<'+>软骨细胞对Jurkat细胞、活化T细胞的最大凋亡率分别为53.4％,30.3％(E/T=10:1),对照组分别为32.2％,13.1％(E/T=10:1),差异显著,表明FasL<'+>软骨细胞可有效地发挥免疫抑制功能;3、在体内,移植FasL+软骨细胞的形态与正常软骨组织基本一致,结节形成后第2、3周,免疫组化检测显示FasL<'+>软骨组织表达Ⅱ型胶原、FasL<'+>软骨细胞和组织周围炎症反应淋巴细胞浸润明显下降,延长软骨细胞存活时间.结论:FasL<'+>软骨细胞抑制同种异体免疫排斥的发生,有利于延长移植物的存活,为应用基因转染技术建立同种异体软骨移植的免疫耐受提供了实验依据.