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人参是一种名贵的药材,人参中的天然成分人参皂苷更是具有很高的药学价值.本文主要研究的内容是以人参二醇类皂苷(PPD)Rb1、Rb2、Rb3、Rd、Rc为底物,利用微生物酶法转化生产人参稀有皂苷C-K,用硅胶柱分离提取人参皂苷C-K,并用高效液相色谱和核磁共振对其纯度与结构进行确认.为了得到具有较高产对人参皂苷糖苷酶的菌株,我们选取了6种菌株,研究它们产生皂苷糖苷酶的能力.实验发现菌株sp.848产皂苷糖苷酶的能力最强.而在培养基的最适诱导物及比例的筛选中,通过实验确定,以豆粕为诱导物[5°麦芽汁45ml+10％(W/V)豆粕15ml+40ml自来水]时,sp.848产皂苷糖苷酶的能力最强.此外,经实验发现该菌株在28℃至30℃条件下发酵9天,该酶活性最好.为了提高皂苷糖苷酶对人参二醇类皂苷(PPD)转化生成人参皂苷C-K的产率,本实验对酶反应条件进行了探索,确定了酶反应的最佳底物浓度、反应时间、pH值及反应温度.皂苷糖苷酶反应的最佳底物浓度是0.5％,最佳反应时间是24小时,最佳pH值是5.0,酶最佳反应温度是40℃.依据最适的酶反应条件扩大酶反应.酶反应产物用大孔树脂AB-8和D-280进行吸附、脱色、干燥处理,经TLC法检测发现皂苷C-K的理论收率为67.6％.再将酶反应产物用硅胶柱层层析法进行分离纯化,以氯仿和甲醇(V氯仿:V甲醇=9:1)的混合液为沈脱剂进行洗脱.将收集的纯品在旋转蒸发器上蒸干、称重,确定其重量收率为33％.对所提纯的人参皂苷C-K用高效液相色谱进行纯度检测,发现其纯度在95％以上.以核磁共振检测其结构,确定其为人参皂苷C-K.菌株sp.848在培养基[5°麦芽汁45ml+10％(W/V)豆粕15ml+40ml自来水]中发酵培养9天得到的发酵液,经硫酸铵沉淀、透析后,用DEAE纤维素离子交换柱层析法纯化出皂苷糖苷酶,进一步作SDS-聚丙烯酰胺电泳,发现其分子量约为82kDa.