云南核桃枝干病害病原真菌的鉴定及多样性研究

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核桃是我国重要的木本油料树种,具有重要的经济价值生态价值。云南是核桃生产大省,其种植面积、产量和产值均居全国首位。然而随着云南核桃种植面积的扩大及连片大面积种植,加之管理粗放、气候条件反常等诸多不良因素的影响,核桃病虫害频发并已严重威胁着云南核桃产业的发展。本研究对云南核桃主产区(10个地州的18个县区)的核桃枝干病害进行较全面地病害标本采集,通过徒手切片、组织分离培养、显微观察等传统方法对云南核桃主产区核桃枝干病害的病原菌进行形态鉴定,并对部分形态鉴定困难的分离菌株辅以分子鉴定;在病原菌鉴定的基础上,对鉴定结果采用Shannon-wiener和Simpson’s diversity指数进行多样性分析,以期较全面的了解云南核桃主产区枝干病害病原菌种类及发生危害现状,为云南省核桃枝干病害的防治提供依据,丰富核桃枝干病害病原真菌的物种多样性的研究,为核桃病害的深入研究奠定基础。研究结果如下:1.对云南10个地州市的18个县区的核桃病枝干进行了采集,共采集样本233份。其中,从楚雄和曲靖地区所采集的样本量最大,分别为66份和64份,从文山采集的样本最少,仅1份。通过对225份病枝干样本进行徒手切片,共获得232个切片鉴定样本。2.对232个切片鉴定样本进行形态学鉴定,从中鉴定出病原真菌27属31种。其中,子囊菌门真菌9属10种,担子菌门真菌5属5种,有丝分裂孢子类群真菌13属16种,另有2属2种寄生性种子植物。在切片鉴定出的病原真菌中,胡桃多毛壳孢(Pestalosphaeria juglandis)、朱红丛赤壳(Nectria cinnabarina)、星芒状弯孢聚壳(Eutypella stellulata)、痂囊腔菌属之一种(Elsinoe sp.)、假蕉孢壳属之两种(Diatrypella sp.1、Diatrypella sp.2)、毛栓菌(Trametes hirsuta)、层叠树舌(Ganoderma lobatum)、普通瘤座孢(Tubercularia vulgaris)、枫香亚盘霉(Didymosporium liquidambaris)、多隔长蠕孢(Helminthosporium multiseptatum)、拟小丛长蠕孢(H.pseudomicrosorum)、绒长蠕孢(H.velutinum)、壳梭孢属之一种(Fusicoccum sp.)、盘针孢属之一种(Libertella sp.)和大单孢属之一种(Aplosporella sp.)等11属16种为核桃枝干新病原。胡桃多毛壳孢(P.juglandis)为拟定新种。3.病部切片鉴定结果显示,拟茎点霉属(Phomopsis)、小穴壳属(Dothiorella)、壳梭孢属(Fusicoccum)和长蠕孢属(Helminthosporium)四属真菌出现的频率最高(分别为12.93%、12.07%、13.36%和12.50%)且分布地最广(均分布于8个以上的区县);其次为葡萄腔座菌属(Botryosphaeria)真菌和盘针孢属(Libertella)真菌,其出现频率均为7.76%,但前者的分布较广(6个区县),后者的分布较窄(2个县区)。4.采用组织分离法,从200份核桃枝干病害样本(担子菌引起的病害样本除外)上共分离获得145个纯菌株。产孢后经形态学鉴定,它们分别隶属于14个属的14个种,另有6个未知属种。纯培养物鉴定与病部切片鉴定相吻合的病原真菌属包括拟茎点霉属、茎点霉属(Phoma)、小穴壳属、壳梭孢属、盘针孢属和聚壳座属(Eutypella)真菌。5.病原菌的纯培养物鉴定结果显示,拟茎点霉属(胡桃楸拟茎点霉Phomopsis juglandina)真菌的分离频率最高,达到39.31%,且分布广泛(9地)。病部切片和纯培养物鉴定结果都表明拟茎点霉属为引起云南核桃枝干病害的优势属。6.采用Shannon-Wiener指数和Simpson’s diversity指数进行多样性分析,结果显示,各地区病原多样性差异较大。曲靖地区核桃枝干病害的病原种类数量最多,丰富度最高,其次为昭通、保山、临沧和大理等地,昆明、丽江和怒江3个州市核桃枝干病害的病原种类和数量均较少。8.云南核桃枝干病害主要有枯枝病、溃疡病、烂皮病、木腐和寄生性种植植物病害5类,其中枝枯病类分布最广。多样性分析显示,无论是Shannon-Wiener指数还是Simpson多样性指数,枯枝病的病原种类和数量均远高于其它4类病害,表明枯枝病类是云南省核桃枝干病害中最重要病害之一。
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