论文部分内容阅读
以链霉菌质粒SCP2<*>的衍生质粒pHJL400为基础,构建了能够在大肠杆菌到链霉菌之间进行高效接合转移的质粒pGH112.pGH112含有在大肠杆菌和链霉菌中复制起始位点,以及分别在大肠杆菌和链霉菌中进行筛选的抗性标记.用pGH112转化Escherichia coli ET12567(pUZ8002)后,与天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolorA3(2))、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans TK54)、毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini NRRL15443)、委内瑞拉链霉菌(Streptomyces,venezuelae ISP5230)和红色糖多孢糖(Saccharopolypora erythraea)进行接合,发现该文构建的pGH112与pKC1139相比,接合转移效率高,稳定性好,而且宿主范围较广.把组成型启动子ermE<*>与绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到该文构建的pGH112,通过接合转移到链霉菌中,gfp获得表达,证明其可以用作基因接合转移的有效工具载体,这为研究链霉菌的基因功能创造有利条件.将tra-cassette(包括两个启动子permE和PIJ101来源的tra)克隆到pGH112和pKG1139中,分别得到质粒pGB112和pKT1226,通过接合将质粒转入除虫链霉菌、委内瑞拉链霉菌、天蓝链霉菌和变青铅链霉菌等.以含有这种质粒的链霉菌为供体菌,以委内瑞拉链霉菌VS655等合适的链霉菌为受体菌,研究了pGB112和pKT1226介导的链霉菌种间转移.研究表明tra单独作用能够引起质粒在链霉菌之间转移,转移方向为tra<+>供体菌至tra<->受体菌.把除虫链霉菌阿维霉素合成酶基因簇的一端一段序列克隆到pGB112中,获得pGHB112,通过接合进入S.avemitilis获得供体菌;同时也构建了具有卡那霉素抗性并且能够与S.avemitilis DNA发生双交换的受体菌S.coelicolor WH112,尝试了单个tra基因介导的链霉菌诱导染色体转移的能力.根据前人研究结果和该研究进一步探讨离链霉菌接合型质粒介导的质粒转移与致育的机理,认为质粒转移与致育过程.可能存在一个短暂的"细胞融合",而转移基因在这个过程起着比较关键的作用.