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背景：骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,青少年多发,青少年的发病率可达8-11/100万。上个世纪80年代之前,骨肉瘤患者5年生存率大约为20%,应用化疗可以大幅度降低患者肺部转移率,患者5年生存率可提高到60%～80%,近20年以来,虽然全球范围内众多研究机构进行了大量的研究,但是骨肉瘤患者的生存率仍然无明显提高,且目前用于骨肉瘤的化疗药物毒副作用很大,因此,开发新的抗骨肉瘤的化疗药物具有非常重要的意义。免疫原性细胞死亡(ICD)指理化因素在诱导肿瘤细胞凋亡的同时,肿瘤细胞由不具备免疫原性转变为具有免疫原性,并由此激活特异性T淋巴细胞,诱发机体产生特异性细胞免疫应答,达到清除肿瘤的目的。免疫原性细胞死亡伴有一系列特征性的分子事件发生,包括钙网蛋白(CRT)从细胞质转位到细胞膜表面,细胞外ATP的释放及高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。到目前为止,只有少数化疗药物可以诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡,而且国内外还没有关于诱导骨肉瘤细胞免疫原性死亡的报道。目的：研究辣椒素与顺铂对骨肉瘤细胞的生长抑制及凋亡作用,在药物诱导细胞凋亡的基础上,进一步探讨辣椒素与顺铂能否诱导人骨肉瘤细胞免疫原性死亡,为开发新的抗骨肉瘤化疗药物奠定基础。方法：第一部分：分别用辣椒素和顺铂作用于人骨肉瘤细胞MG-6324小时后用MTT检测辣椒素和顺铂对MG-63细胞的生长抑制作用,确定半数致死量,接下来分别用DNA片段化分析、线粒体膜电位及western blot等方法分析辣椒素和顺铂能否诱导MG-63细胞凋亡。第二部分：用辣椒素和顺铂作用于MG-63细胞12及24小时后,流式细胞术检测细胞膜上CRT表达量的变化,荧光素酶法检测细胞外ATP的释放,ELISA检测细胞上清中HMGB1的分泌。进一步将辣椒素或顺铂作用后的MG-63细胞分别与人外周血单核细胞诱导的树突状细胞(DC)一起孵育,然后检测DC细胞对辣椒素或顺铂作用后的MG-63细胞的吞噬效率,最后检测其诱导T淋巴细胞分泌细胞因子IL-4及IFN-γ的能力,由此判断辣椒素能否诱导骨肉瘤细胞发生免疫原性细胞死亡。结果：第一部分：MTT结果显示,辣椒素及顺铂作用MG-63细胞24小时后,能抑制MG-63细胞增殖,且呈剂量依赖性。DNA片段化分析、线粒体膜电位的检测及Western blot等分析结果显示,辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡。第二部分：MG-63细胞被辣椒素处理后,在凋亡早期,CRT由内质网转移到细胞膜表面；在凋亡晚期,细胞外ATP及HMGB1的释放增加。而顺铂处理MG-63细胞后,不能诱导CRT的外翻、细胞外ATP分泌及HMGB1的释放。且辣椒素处理的MG-63细胞更易于被DC细胞吞噬,将T淋巴细胞与经辣椒素处理肿瘤细胞所致敏的DC细胞共同孵育后,T淋巴细胞分泌IFN-γ的能力明显增强。结论：辣椒素可作为抗肿瘤制剂诱导人骨肉瘤细胞凋亡,且促进骨肉瘤细胞的免疫原性转化,使辣椒素作用的骨肉瘤细胞更易于被DC细胞所摄取,由此介导骨肉瘤细胞的免疫原性死亡。