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目的:通过研究Graves病患者与健康对照者粪便样品中的微生物种类及数量,探索Graves病患者肠道菌群结构是否存差异及差异菌群与该病发生发展的关系。
方法:收集Graves病患者(14例)及健康对照者(13例)的新鲜粪便作为研究标本,根据年龄、性别匹配入组,用试剂盒提取粪便样品中的细菌基因组DNA。根据细菌的16SrRNA基因序列设计V3区通用引物,用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳法(PCR-DGGE)观察两组肠道菌群的差异,找出差异条带、切胶回收、纯化、克隆后进行基因测序,将测序结果经NCBIGenBank对比后确定菌群种类。
结果:变性梯度凝胶电泳后,Graves患者与健康对照组可见差异性条带,各组经QuantityOne4.6.2软件分析发现:第一组实验样品中,Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性差异无意义(P>0.05),Dice相似系数:组间相似度小于两组组内相似度,后经聚类分析可见,除G8、G10样品外,Graves病组与健康对照组样品均分别聚为一类;第二组实验样品中,Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性差异无意义(P>0.05),Dice相似系数:组间相似度小于两组组内相似度,除G6样品外,其他样品均分别聚为一类;第三组实验样品中,Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性差异有意义(P<0.05),Dice相似系数:组间相似度小于两组组内相似度,后经聚类分析可见,除C11样品外,其他样品均分别聚为一类。
从肠道菌群多样性分析来看,Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性无显著差异。聚类分析结果显示,Graves病组聚为一类,健康对照组聚为一类,说明健康对照组和Graves病组的肠道菌群丰度有所不同,确实存在差异。进一步发现Graves病人肠道优势菌群与正常健康组的有所不同,第一组G2~G5样品第24号条带在Graves病肠道菌群中优势明显,但在健康对照组中并未显示出优势性,将其切割回收测序,经GenBank比对后,鉴定为普雷沃菌属。
结论:本研究发现肠道菌群的变化,可能与Graves病的发生存在密切的联系,普雷沃氏菌属数量的改变可能与Graves病相关,进一步的定量分析研究有待进行。