Lnc002783在山羊骨骼肌中的表达及功能研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shiguangli010
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此次试验主要通过生物信息学和EdU细胞增殖试验,挑选出Lnc002783作为试验的研究对象。然后,通过分析Lnc002783及其预测的靶基因在安徽白山羊骨骼肌组织和细胞中的表达谱及功能,从而可以在分子水平上为山羊育种提供理论依据。(1)通过I型胶原酶与胰酶两步酶消化法分离得到山羊骨骼肌卫星细胞(Satellite cells,SCs)。另外,基于课题组内前期安徽白山羊肌肉测序数据,利用miRanda、PITA及RNAhybrid三款软件共同预测与差异LncRNA互作的miRNA,并挑选了8 个 LncRNA(Lnc002506、Lnc014160、Lnc002488、Lnc008909、Lnc008726、Lnc002783、LNC001690、LNC-009639)和6个miRNA(chi-miR-214-3p、chi-miR-193b-5p、chi-let-7a-5p、chi-miR-188-5p、chi-let-7b-3p、chi-miR-124a)作为初步的研究对象,进行下一步试验。(2)干扰8个LncRNA和过表达6个miRNA后,EdU细胞增殖试验结果发现Lnc002783和其预测的靶基因miR-188-5p分别对细胞增殖具有促进和抑制的作用。(3)采集安徽白山羊组织样本,包括F65、F90、F120、F135、B1和B90共6个不同发育阶段的背最长肌组织;成年安徽白山羊的心、肝、脾、肺、肾、背最长肌和腿肌。同时采集培养2d、3d及4d的山羊SCs样本,通过荧光定量PCR检测Lnc002783和miR-188-5p在山羊各组织和细胞中的表达规律。试验结果表明Lnc002783和miR-188-5p与山羊骨骼肌的生长发育相关,且它们的表达趋势具有一定的负向关系。(4)干扰Lnc002783表达后,qPCR检测miR-188-5p的表达变化。同时检测了过表达miR-188-5p后,Lnc002783的表达变化。结果发现,干扰Lnc002783表达后,miR-188-5p的表达反而下调,而过表达miR-188-5p后,Lnc002783的表达下调。(5)通过转染si-Lnc002783和si-NC 24 h后,再诱导细胞分化72 h,qPCR检测细胞分化标志基因Myog的表达变化。试验结果表明,Lnc002783能够抑制山羊骨骼肌卫星细胞的分化。综上所述,本试验成功获取了山羊骨骼肌卫星细胞,且挑选出的Lnc002783和miR-188-5p对卫星细胞增殖分别有促进和抑制的作用。Lnc002783和miR-188-5p与山羊肌肉生长发育过程相关且两者之间可能的确存在靶向关系。此外,Lnc002783对山羊骨骼肌卫星细胞的分化具有抑制作用。
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