逆转录转座子LINE-1或L1,是人类基因组中唯一有自主转座活性的转座元件。L1是基因组进化的主要参与者,塑造基因的形态和功能,与衰老和免疫相关;同时也导致基因组不稳定,诱导基因突变,与肿瘤和自身免疫性疾病相关。因此,针对调控L1网络的研究具有非常重要的意义。L1是先天性抗病毒免疫反应的内源性激活剂,L1活性过高会导致AGS疾病的发生进一步佐证了L1对细胞内固有抗病毒免疫的激活调控作用;然而人们对于病毒抗L1的反向作用机制与调控的理解并不全面。宿主细胞本身进化出一系列的限制性因子,通过不同的机制调控逆转座子给基因组稳定性带来的不利影响;但是,更为深入与广泛的细胞内调控L1的机制仍有待探索。因此,本论文通过对肠道病毒、新型冠状病毒SARS-CoV-2编码蛋白与细胞内类泛素化通路Neddylation调控L1逆转座活性的机制进行研究,为全面理解病毒及细胞因素调控L1逆转座的网络提供理论依据。本文通过对病毒与细胞来源因素调控L1的研究,得到以下结论:1.肠道病毒感染抑制L1逆转座肠道病毒EV-D68和EV-A71的感染下调了L1的逆转座活性。我们筛选了不同肠道病毒非结构蛋白对L1逆转座活性的影响,并识别了2A、3A、3C和EVORF2p能够抑制L1逆转座活性。病毒蛋白2A通过抑制L1编码蛋白的表达抑制L1逆转座活性。病毒蛋白3A和3C通过限制L1 ORF2p逆转录酶活性实现对L1逆转座的限制。新发现的病毒蛋白ORF2p能够抑制细胞内L1 ORF1p的积累。总之,我们的研究发现了肠道病毒复制过程中对L1逆转录转座子的严格控制,揭示了肠道病毒蛋白2A、3A、3C和EV-ORF2p参与调控逆转录转座子L1的不同机制,为理解肠道病毒调控逆转录转座子L1的网络提供了实验依据,为探索病毒蛋白作为逆转座限制因子提供依据。2.SARS-CoV-2编码蛋白调控L1逆转座活性我们筛选了单个SARS-CoV-2编码蛋白对L1逆转座率的影响,通过使用成熟的L1逆转座报告系统,我们发现一些病毒蛋白在不同水平上限制了L1的转座活性;特别是Nsp1、Nsp3、Nsp5和Nsp14对L1具有更高的抑制活性。与Nsp3和Nsp5相比,Nsp1和Nsp14显著下调了L1 ORF1p的积累。Nsp3、Nsp5和Nsp14特异性抑制L1 ORF2p逆转录酶活性。我们的研究为SARS-CoV-2激发复杂的网络来调节L1的活性提供了有利证据。3.类泛素化修饰Neddylation促进L1逆转座活性我们发现蛋白质翻译后修饰Neddylation能够促进L1逆转座活性。Neddylation抑制剂,Pevonedistat,能够有效的抑制L1逆转座活性。类泛素化E1（NAE）和E2（UBE2M）是Neddylation修饰通路的重要组成部分,抑制NAE和UBE2M可以使L1逆转座活性明显下调。通过进一步的分子机制研究,我们发现抑制Neddylation通路关键分子并不影响L1 ORF1p表达水平,但可以显著抑制L1 RNP中ORF2p的逆转录酶活性。此外,我们也初步探索了Neddylaiton的底物Cullin蛋白对L1逆转座活性的影响,结果显示Cullin1、3、4A显性失活突变体通过下调L1 RNP中ORF2p逆转录酶活性抑制L1逆转座活性。我们的研究表明,Neddylation参与组成细胞内调节L1活性的网络。基于此发现,Neddylation信号通路可能成为发现更多L1调控因子的突破点。Neddylation信号通路可能成为治疗L1失调的潜在靶点。