论文部分内容阅读
目的从肠道菌群、胃肠激素和胃肠动力等角度,探讨围绝经期肝郁证大鼠胃肠功能紊乱的机制,丰富木郁克土理论的现代科学内涵。方法1.48只2月龄SPF级雌性SD大鼠,适应性喂养1个月后,按体质量分层随机分为假手术组、围绝经期组、围绝肝郁组和柴胡疏肝散组。假手术组摘除卵巢旁的脂肪,其余各组行双侧卵巢摘除手术。围绝肝郁组和柴胡疏肝散组采用慢性不可预知性温和应激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)建立肝郁模型。2.采用苏木素-尹红(Hematoxylin-eosin Staining,HE)染色观察大鼠阴道脱落细胞涂片。3.自CUMS第1天起,假手术组、围绝经期组和围绝肝郁组大鼠灌胃生理盐水,柴胡疏肝散组大鼠则灌胃柴胡疏肝散水煎剂,每天1次,连续21天。4.观察体质量、饲料消耗、总移动距离、垂直次数、中心区时间、强迫游泳不动时间、1%糖水消耗率。5.观察胃排空法和肠推进率,检测胃肠动力。6.酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测血清雌二醇(Estradiol,E2)、5羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、P物质(Substance P,SP)、胃动素(Mtlilin,MTL)含量。7.悬液芯片检测血清白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)含量。8.实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,q-PCR)检测结肠组织闭锁蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(Zona Occludens 1,ZO-1)的信使核糖核酸(mRNA)表达。9.蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测结肠组织Occludin和ZO-1的蛋白表达。10.16s rDNA扩增子测序检测大鼠粪便中肠道菌群。结果1.假手术组阴道脱落细胞由上皮细胞、角化细胞、角化细胞和上皮细胞夹杂、白细胞组成规律的动情周期变化;其余三组阴道脱落细胞呈现持续白细胞,失去规律的动情周期,持续处于动情间期。2.在旷场实验方面,围绝肝郁组造模前后总移动距离和垂直次数下降(P<0.01)。在强迫游泳不动时间方面,围绝肝郁组较假手术上升(P<0.05);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组下降(P<0.01)。在糖水消耗率方面,围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.05);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.01)。3.在体质量上,围绝经期组重于假手术组(P<0.01),围绝肝郁组轻于围绝经期组(P<0.01);在体质量增长率上,围绝经期组较假手术组升高(P<0.01),围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.01),柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.05);在饲料消耗上,围绝肝郁组较围绝经期组呈下降趋势,柴胡疏肝散组较围绝肝郁组呈上升趋势。4.血清E2含量,围绝经期组、围绝肝郁组和柴胡疏肝散组较假手术组均下降(P<0.01),三组间无统计学差异。血清5-HT含量,围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.01)。5.围绝肝郁组胃残留率高于围绝经期组(P<0.01),肠推进率低于围绝经期组(P<0.01);柴胡疏肝散组胃残留率低于围绝肝郁组(P<0.01),肠推进率高于围绝肝郁组(P<0.01)。6.血清MTL含量,与假手术组比较,围绝经期组有下降趋势,但围绝肝郁组下降显著(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组显著上升(P<0.01)。血清SP含量,围绝经期组较假手术组下降明显(P<0.05);围绝肝郁组较围绝经期组显著下降(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组显著上升(P<0.01)。7.小肠组织MTL、SP含量,围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.01)。8.在肠道菌群方面,各组物种多样性发生改变,组间存在显著差异(P<0.01)。乳杆菌(Lactobacillus)丰度在假手术组和围绝经期组间存在一定的下降趋势;围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.01)。9.在结肠组织Occludin mRNA表达方面,围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.05)。在结肠组织ZO-1 mRNA表达方面,围绝肝郁组较围绝经期组下降(P<0.05);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组上升(P<0.01)。在结肠组织Occludin和ZO-1蛋白表达方面,与假手术组比较,围绝经期组的Occludin呈下降趋势,ZO-1下降(P<0.01);与围绝经期组比较,围绝肝郁组的Occludin和ZO-1蛋白表达进一步下降(P<0.01);与围绝肝郁组比较,柴胡疏肝散组的Occludin和ZO-1蛋白表达的上升(P<0.01)。10.在血清IL-1β方面,围绝经期组较假手术组呈上升趋势;围绝肝郁组较围绝经期上升(P<0.05);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组呈下降趋势。在血清IL-6方面,围绝经期组较假手术组上升(P<0.05);围绝肝郁组较围绝经期组上升(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组下降(P<0.05)。在血清TNF-α方面,围绝经期组较假手术组上升(P<0.01);围绝肝郁组较围绝经期组上升(P<0.01);柴胡疏肝散组较围绝肝郁组呈下降趋势。结论1.围绝经期肝郁证大鼠会出现饲料消耗减少,体质量下降。2.肝郁引起围绝肝郁组大鼠大鼠体质量下降,与胃肠激素下降、炎症因子上升、肠粘膜通透性上升、胃肠动力减弱、肠道菌群失调导致的胃肠功能紊乱密切相关。3.柴胡疏肝散通过改善肝郁状态,上调胃肠激素,下调炎症因子,抑制肠道菌群失调,从而恢复胃肠功能。