异丙肾上腺素诱导的斑马鱼心气虚证心衰模型caspase-3凋亡的实验研究

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【目的】  用盐酸异丙肾上腺素药浴斑马鱼,构造心气虚证慢性心衰模型,并探究该模型心肌细胞caspase-3凋亡的情况。  【方法】  用盐酸异丙肾上腺素(Isoproterenol, ISO)持续多时间点药浴斑马鱼,构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型,连续记录不同时间斑马鱼心率,观察心脏表型,并通过斑马鱼整体免疫荧光检测心肌细胞 Caspase-3的表达情况。  【结果】  1.ISO对斑马鱼心率的影响:与对照组相比,经ISO处理过的实验组斑马鱼心率在48hpf(hours post-fertiliaztion,受精后小时)后ISO处理组心率均明显减慢,各时间点心率与对照组比均有显著差异(P<0.01)。  2.ISO对斑马鱼心脏形态的影响:适当放大倍数下观看,与对照组相比较,在体视显微镜观察48 hpf实验组斑马鱼心室内有少量积血,心包增大,静脉窦内淤血,血流较减慢;上述症状72 hpf实验组斑马鱼中更加明显;96hpf静脉窦淤血较72hpf明显减轻,心脏开始线性化,心包继续增大;120hf静脉窦淤血、心脏线性化明显缓解,说明洗脱药物后心衰得到缓解。  3.斑马鱼整体免疫荧光法检测心肌细胞Caspase-3蛋白的表达情况:与对照组相比,实验组斑马鱼心室Caspase-3蛋白表达更为显著,且心房未见明显凋亡信号。  【结论】  1. 用浓度为0.02 mg/ml ISO药浴斑马鱼,分别在24、48、72hpf 进行换液,可构造斑马鱼心气虚证慢性心衰模型;  2. 经ISO诱导的斑马鱼心气虚证慢性心衰模型,其心室肌细胞Caspase-3蛋白的表达上调,且心房未见明显凋亡信号,说明心室肌细胞凋亡参与了斑马鱼心气虚证慢性心衰进程。
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