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目的:克隆小鼠白细胞介素21(mIL-21)基因,构建其真核表达质粒,观察mIL21基因治疗小鼠Sp2/0皮下肿瘤的效果,并分析其可能机制。方法:分离BALB/c小鼠脾细胞,Con A活化后用RT-PCR方法扩增mIL-21 cDNA,克隆入真核细胞高效表达质粒pcDNA3.1中,构建重组mIL-21真核表达质粒pcDNA3.1/mIL-21。酶切并测序鉴定重组子的正确性。将已鉴定的重组质粒用脂质体法转染Sp2/0细胞,用RT-PCR和Western Blot法鉴定转染细胞中mIL-21转录和翻译水平的表达,用H3-(TdR)掺入和MTT比色法检测表达产物对小鼠T细胞的协同增殖和NK细胞杀伤活性增强作用。建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒pcDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,通过观察肿瘤的生长情况、CTL、NK、LAK等免疫细胞活性、抗体的产生和细胞因子产生情况等指标观察mIL21基因治疗对小鼠Sp2/0皮下肿瘤的疗效,并探讨其抑制肿瘤生长的可能机制。结果:成功从Con A活化的小鼠T细胞中扩增mIL-21 cDNA,测序结果和GenBank原始记录(AF254070)有3个碱基的误差,但编码蛋白无差异,我们的序列已经被GenBank收录,GenBank登录号:AY428162。成功构建了含mIL-21的真核细胞高效表达质粒pcDNA3.1/mIL-21,酶切鉴定正确。构建的pcDNA3.1/mIL-21质粒脂质体法转染Sp2/0细胞后,RT-PCR法可以检测到mIL-21转录水平的表达,Western Blot法可以检测到mIL-21蛋白水平的表达。表达的mIL-21可在体外协同Con A促进小鼠T细胞增殖,可以增强小鼠NK细胞的杀伤活性。成功建立了小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型。pcDNA3.1/mIL-21瘤体内直接注射后,肿瘤生长减慢,肿块重量减轻,荷瘤鼠的胸腺细胞增殖功能明显增强,CTL 和NK细胞活性明显增强,IFN-?水平明显增高,LAK细胞活性和抗体滴度水平无明显增强。结论:成功得到了小鼠IL-21的cDNA,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1/mIL-21。该重组质粒可以良好地表达具有生物学活性的mIL-21。用pcDNA3.1/mIL-21在小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型的瘤体局部内注射,可以明显抑制肿瘤的生长;小鼠的细胞免疫活性明显增强,且以NK和CTL细胞活性增强为主;IFN-?水平显著增强;体液免疫无明显改变。IL-21有望在肿瘤的基因治疗中发挥重要的作用,其抗肿瘤机制可能和增强机体的细胞免疫功能,特别是NK和CTL细胞活性有关。