【摘 要】
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番鸭"白点病"(Muscovy Duck White Necrosic Disease,MDWND)是近年来新发现的一种急性传染性疾病.此病因其肝脏特征性病变又称为"花肝病".该研究重点对番鸭"白点病"病原进行
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番鸭"白点病"(Muscovy Duck White Necrosic Disease,MDWND)是近年来新发现的一种急性传染性疾病.此病因其肝脏特征性病变又称为"花肝病".该研究重点对番鸭"白点病"病原进行分离培养、鉴定、纯化;易感动物攻毒试验;病毒蚀斑克隆,克隆病毒回归试验;病毒粒子形态观察;病毒的理化特性研究;人工感染致病番鸭病理组织切片动态观察;病毒部分基因PCR扩增、重组、酶切、序列测定和比较,病理组织PCR扩增快速鉴定等试验,鉴定出MDWND的一个广东南海分离株为细小病毒科成员,对该病防治具有重大意义.从病死雏番鸭脏器中分离到两种菌和一种病毒.细菌经分离培养纯化、染色镜检和生化鉴定:一种为大肠杆菌,另一种为巴氏杆菌,经检验都不是该病的病原;病毒可经番鸭胚尿囊腔盲传或番鸭胚成纤维细胞培养,易感动物攻毒试验表明分离病毒能够复制出典型番鸭"白点病"症状病变:精神萎顿,软脚,喜聚成一团,消瘦,体重减轻,采食量和饮水量减少甚至废绝,腹泻;肝脾均出现大量针头大小的白色坏死点,脾肿大3~7倍等病变;病变肝、脾经接种番鸭胚能重新分离出该病毒,初步确定该病毒为番鸭"白点病"病原.为进一步确定该病毒为番鸭"白点病"致病原,应用蚀斑技术克隆病毒,再于单层番鸭胚成纤维细胞中培养纯化,经3代连续纯化后,制成蚀斑毒液,将蚀斑毒液进行易感动物攻毒试验,可复制出典型的番鸭"白点病"症状与病变并重新分离出病毒.病毒的理化特性表现对酸、高温具有一定耐受性,对胰蛋白酶不敏感,对乙醚、氯仿不敏感,表明该病毒无囊膜;病毒核酸类型鉴定表明:在加了5-氟-2-脱氧尿苷的营养液中,病毒的繁殖受到明显的抑制,该病毒应为DNA病毒.病死番鸭病理组织切片动态观察可见肝组织有大量局灶性坏死灶,周围有大量淋巴细胞浸润;脾白髓内的淋巴细胞坏死,形成多量坏死灶.肝和免疫器官脾、胸腺、法氏囊受损最严重.该研究根据病毒粒子大小和理化特性,初步将其归类于细小病毒科,针对禽细小病毒VP1基因设计了1对保守引物,长度为1030bp,抽提病毒核酸,应用RNaseA和S1酶切鉴定病毒的核酸类型为DNA病毒;用细小病毒保守引物经PCR扩增出一条约1030bp条带(MDWNDVVPl),VP1经HindⅢ酶切可切成2条带,一条约394bp,另一条约636bp.分别将尿囊液病毒、超离病毒、细胞液病毒抽提的VP1克隆到pGEM-T载体中,对获得的重组质粒pGEM-T-VP1进行PCR鉴定和酶切分析,对重组阳性菌进行测序分析.综上所述及试验表明,该研究分离到一株新的番鸭"白点病"病毒,该病毒是细小病毒科的成员之一.目前国内外已有的同类病症报道病原还有呼肠孤病毒等,因鸭病毒性肝炎就存在有一病多病原的先例,推测番鸭"白点病"也有多种病原型存在的可能性.
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