卵巢癌死亡率位居妇科恶性肿瘤首位，近年来，虽然对卵巢癌的诊治取得了一些进展，但患者5年生存率仍徘徊在25％-30%。发生远处转移、浸润和化疗耐药是卵巢癌患者死亡率高和预后差的主要因素之一。因此，寻找手术、化疗及放疗之外的治疗方法显得尤为重要。目前，分子靶向治疗已逐渐成为一种新的肿瘤治疗策略。近年来，关于卵巢癌的分子靶向治疗已取得了一定的研究成果，但临床应用效果仍不理想，分子靶向药物治疗的靶向性差仍是尚待解决的问题。本课题组前期采用全细胞差减法成功筛选获得了与卵巢癌上皮细胞HO8910特异性结合的短肽（ovarian cancer specific binding peptide，OSBP），通过原核表达的方法成功获得了靶向融合肽﹛转录反式激活因子（trans-activator of transcription，TAT）-OSBP-丝裂原活化蛋白激酶激酶6突变体（E）[mitogen-activated protein kinase kinase6 mutant（E），MKK6（E）]﹜， TAT-OSBP-MKK6（E），即MAP2K6-FP是一种靶向卵巢癌上皮细胞HO8910的具有强穿膜能力的靶向融合肽，体外实验证明其能靶向介导卵巢癌HO8910细胞的凋亡。本研究拟在前期研究的基础上，通过建立卵巢癌HO8910细胞的裸鼠移植瘤模型，进一步探讨MAP2K6-FP对卵巢癌移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制，并将其与紫杉醇联合应用于卵巢癌裸鼠移植瘤，观察两者的联合抗肿瘤效应，为探索新的靶向杀灭卵巢癌HO8910细胞的药物提供实验数据，也为卵巢癌紫杉醇耐药的研究提供理论依据。将自我研发的靶向卵巢癌的融合蛋白MAP2K6-FP与紫杉醇联合运用，探讨其治疗效果，该研究处于国际前沿水平，其成果将有效的解决卵巢癌临床治疗的问题。　　第一部分 MAP2K6-FP抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究　　目的:　　构建卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型，探讨MAP2K6-FP对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响。　　方法:　　1.SPF级雌性 BALB/C nu-nu裸鼠18只随机分为实验组（5×106 HO8910+20ummol/L MAP2K6-FP腹腔种植）、阴性对照组（5×106 HO8910+20ummol/L MAP2K6-FP+SB202190腹腔种植）和空白对照组（5×106 HO8910+生理盐水腹腔种植）共3组，每组6只，细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型。　　2.每2天测量腹围，4周后解剖裸鼠，观察裸鼠成瘤情况，测定腹水量，统计肿瘤播散器官数及瘤结节数，称量瘤体重量并计算抑瘤率。　　3.采用HE染色分析移植瘤的病理形态学特点。　　4.采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的核苷酸缺口末端标记（TUNEL）法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（apoptosis index,AI）。　　5.免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。　　6.蛋白印迹法检测各组移植瘤组织中P38蛋白表达。　　结果:　　1.与阴性对照组和空白对照组比较，实验组裸鼠腹围(70.00±1.41) mm增长明显滞后[阴性对照组腹围（83.0±5.8）mm，空白对照组腹围（86.1±4.0）mm]（P＜0.05）；腹水量明显减少（P＜0.05）；肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少（P均0.05），抑瘤率达70.99%。　　2.实验组、阴性对照组和空白对照组的AI分别为(20.44±1.20)%、(4.94±0.24)%和(4.00±0.79)%，实验组的AI明显高于阴性对照组和空白组（P＜0.05）。　　3.实验组、阴性对照组和空白对照组裸鼠移植瘤组织中VEGF蛋白的阳性表达率分别为21．2％、81．4％和85．7％，实验组的VEGF蛋白阳性表达率低于阴性对照组和空白组（P＜0.05）。　　4.实验组、阴性对照组和空白对照组的P38相对表达量分别为(0.40±0.01)、(0.22±0.01)和(0.20±0.01)，实验组的P38相对表达量明显高于阴性对照组和空白组（P＜0.05）。　　结论:　　MAP2K6-FP能显著抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的生长、侵袭及转移。　　第二部分 MAP2K6-FP对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用　　目的:　　构建裸鼠皮下移植瘤模型，探讨MAP2K6-FP对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其可能的机制。　　方法:　　1.建立卵巢癌HO8910细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，分为实验组（给予MAP2K6-FP腹腔注射）、阴性对照组（给予TAT-OSBP腹腔注射）和空白对照组（给予0.9%NaCl溶液腹腔注射），比较3组裸鼠移植瘤的生长速度、体积和裸鼠体质量。　　2.TUNEL法、免疫组织化学法和蛋白质印迹法分别检测移植瘤组织中细胞的凋亡情况、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达以及p38蛋白的表达。　　结果:　　1.实验组裸鼠移植瘤的生长速度滞后于阴性对照度和空白对照组（P＜0.05）；实验组裸鼠移植瘤体积为（214±92）mm3，小于阴性对照组（804±98）mm3和空白对照组（812±112）mm3（P均＜0.05）；实验组裸鼠平均肿瘤质量为（0.23±0.11）g，小于阴性对照组（0.79±0.19）g和空白对照组（0.74±0.17）g；而阴性对照组与空白对照组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。　　2.实验组肿瘤细胞的AI为(28.88±2.03)%，高于阴性对照组(5.13±0.72)%和空白对照组(4.78±0.87)%( P<0.05)；实验组、阴性对照组和空白对照组裸鼠移植瘤组织中 PCNA蛋白的阳性表达率分别为(32.3±0.87)%、(80.5±0.72)%、(81.4±1.03)%(P<0．05)；实验组p38蛋白相对表达量为(0.45±0.01)，高于阴性对照组的（0.22±0.02）和空白对照组的（0.20±0.01）( F=205.96， P<0.001)；阴性对照组与空白对照组的AI、PCNA阳性表达率及p38蛋白的表达水平之间的差异均无统计学意义（P均＞0.05）。　　结论:　　MAP2K6-FP可抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长和PCNA的表达，其机制可能与促进细胞凋亡有关。　　第三部分 MAP2K6-FP强化紫杉醇对卵巢癌的抗肿瘤效应研究　　目的:　　探讨MAP2K6-FP联合紫杉醇对卵巢癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤效应。方法　　1.CCK-8法检测空白对照组（生理盐水）、MAP2K6-FP、紫杉醇、MAP2K6-FP+紫杉醇对卵巢癌HO8910细胞生长抑制作用，并计算MAP2K6-FP和紫杉醇的相互作用(combination index,CI)。　　2.蛋白印迹法检测空白对照组（生理盐水）、MAP2K6-FP、紫杉醇、MAP2K6-FP+紫杉醇处理过的细胞中caspase-3蛋白的表达。　　3.构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型，在体内水平验证MAP2K6-FP联合紫杉醇的抗肿瘤效应。　　4.采用HE染色分析移植瘤的病理形态学特点，免疫组织化学法检测移植瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达。　　5.TUNEL法检测各组移植瘤组织细胞凋亡率。　　结果:　　1.MAP2K6-FP和紫杉醇的CI值波动在0.3-0.85，表明两者之间存在协同作用。　　2.体内实验证明，两者联合应用的抗肿瘤效应高于单一用药，MAP2K6-FP能够强化紫杉醇对卵巢癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤效应。　　3.联合用药组Caspase-3蛋白表达(0.45±0.01)高于单一用药组MAP2K6-FP(0.22±0.02)和紫杉醇(0.20±0.01)(P＜0.05)；联合用药组VEGF蛋白表达水平(0.14±0.06)低于MAP2K6-FP(0.32±0.10)和紫杉醇组(0.29±0.08)及空白对照组(0.78±0.14）（ P<0.01)；联合用药组 PCNA表达水平(18.4%)低于MAP2K6-FP(32.3%)和紫杉醇(29.8%)及空白组(81.4%）（ P<0.05）；TUNEL结果提示联合用药组AI高于单一用药组和空白对照组（P＜0.05）。　　结论:　　MAP2K6-FP能够强化紫杉醇对卵巢癌移植瘤的抗肿瘤效应，其机制可能与激活caspase-3表达，抑制VEGF表达相关。