基于纳米材料和生物膜干涉技术检测T-2毒素研究

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T-2毒素是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种,由镰刀菌、三线镰刀菌等真菌产生,主要污染大麦,小麦,玉米等农作物,且可以通过食物链,对误食了被污染的农作物的动物和人类产生危害。另外,T-2毒素被家畜误食后,也可能以有毒代谢物的形式滞留在家畜的可食用器官中,进而危害人类健康,对畜禽养殖业造成巨大威胁。该毒素还可以直接通过皮肤接触对人类产生皮肤刺激,高剂量的T-2毒素还可以对人类的免疫系统,消化系统以及神经系统功能产生危害。且由于该毒素具有稳定的化学结构,故其耐热性,耐酸性等性质突出,在日常环境中可以达到六至七年毒性不减。因此,如何快速,精确,低成本检测农作物产品中残留的T-2毒素至关重要。本文通过将荧光量子点,磁性微球等纳米材料以及生物分子相互作用系统应用于毒素检测,开发了三种针对农作物中T-2毒素的检测方法。本论文的主要研究内容如下:1合成并表征了聚苯乙烯包覆的磁性四氧化三铁纳米微球,通过对微球表面进行特异性抗体修饰,构建了T-2毒素特异性的磁性探针。通过在荧光量子点表面偶联T-2-BSA制备了荧光探针。通过在检测体系中,荧光探针与待检测样品中可能存在的T-2毒素与磁性探针进行竞争性结合而产生不同的荧光信号进行T-2毒素的快速,精确检测。该方法充分利用了纳米微球的磁性以及荧光量子点高量子产率的特点,达到了快速分离以及痕量检测的效果。2基于上述方法,将T-2毒素特异性抗体通过疏水作用包被在96-微孔板的表面,制成了可以特异性结合T-2毒素的微孔板,通过荧光探针与待检测T-2毒素竞争微孔板上的特异性抗体产生不同强度的荧光信号来检测毒素含量。相较于前一种方法,该方法通过将反应体系置于96-微孔板内,缩小了反应空间,在不影响精确性的前提下,实现了高通量检测,加快了反应速度的同时显著降低试剂消耗和检测成本。3生物分子相互作用分析仪可以通过生物膜层干涉技术(BLI)实时在线检测生物分子之间的相互作用反应过程。通过在该分析仪专用的APS传感器上偶联修饰过的T-2毒素,使毒素特异性抗体和待检测毒素在检测中快速连接到传感器上,改变传感器上光纤膜的厚度产生不同的信号,以此检测溶液中T-2毒素含量。该方法可以将检测中实时免疫结合情况可视化,具有通量高、速度快、操作简单、易于监控等优点。
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