脱细胞真皮是经过特殊的处理方法使皮肤中主要引起免疫反应的细胞成分脱去，留下基底膜和真皮中的胶原基质。胶原的特殊结构及其性质上的优势使胶原在生物医学领域有着十分广阔的应用前景。脱细胞真皮胶原的这种优势来源于它独特的结构、生化及生物学性质。主要特点有：(1)低免疫原性，(2)胶原材料与宿主细胞及组织之间良好的相互作用，(3)胶原对血小板具有凝聚作用，可形成血栓阻止流血，(4)天然胶原纤维的有序纤维状结构，(5)胶原是为结缔组织提供强度的主要蛋白成分，因而可以在广泛范围内满足机体对机械强度的要求。此外，胶原蛋白中还含有丰富的甘氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸，其水解产物中还存在有生理活性肽等等。目前，以脱细胞真皮为主的细胞外基质已在眼整形手术中得到了较为广泛的应用。但在临床研究中发现脱细胞真皮在植入体内后仍有一定程度的收缩，另外传统的睑板替代材料如异体巩膜植入体内后降解速度较快的原因国内未有明确的解释。因此本研究探索了将皮肤制备成脱细胞基质的方法，对真皮胶原蛋白的不同的化学交联方法，找出最适的交联条件，如pH值、浓度及所用溶剂等要素，以交联后的胶原片的热收缩转变温度，降解时间和质量损失为指标进行观察。从免疫学方面分析植入兔眼睑后脱细胞真皮和异体巩膜的转归，同时在临床上观察了脱细胞真皮在眼睑修复中的效果。 第一部分同种异体人脱细胞真皮的制备、保存与鉴定 目的:以不同方法制备脱细胞真皮，比较不同方法、浓度、作用时间对皮肤脱细胞效果的差异，找到适合眼睑再造的皮肤脱细胞方法。 方法: 将取自病原体筛查的人尸体皮肤用鼓式取皮机反取法切下带部分真皮组织的皮肤，经0.01mmol/LTris-HCI缓冲液振荡后分别用0.5％(A)、1.0％(B)、2.0％(C)、4.0％(D)的TrintonX-100溶液脱去细胞，然后将组织胃于0.1％SDS溶液中振荡24小时并再将其按序放入200μg/mlDNA酶和20μg/mlRNA酶溶液中，于常温条件下分别振荡2h。另一组为将剪切好的皮肤分别置于含有0.25％的胰蛋白酶(Trypsin)0.37％EDTA溶液中24(E)或48小时(F)，再将其按序放入200μg/mlDNA酶和20μg/mlRNA酶溶液中，于常温条件下分别振荡2h。制成的材料冻干并经γ射线消毒保存。鉴定方法包括常规HE染色，透射电镜(transmissionelectronmicroscopy,TEM)检查，细菌培养试验。 结论:以TrintonX-100处理的脱细胞真皮结构紧凑，胶原纤维保存完好，其中2％TrintonX-100处理的材料组织残留细胞少，是一种适合在眼睑再造中代替睑板材料的皮肤脱细胞处理的方法。 第二部分脱细胞真皮胶原体外交联的初步研究 目的:研究碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚氨(NHS)对脱细胞真皮胶原的交联效果，找出最适合的交联条件。 方法: 将未交联的脱细胞真皮分别放入EDC对COOH的摩尔比分别设定在5:1，4:1，3:1，2:1，1:1的EDC和EDC与NHS混和的溶液中，同时对溶液设置不同的pH值，金属离子，反应时间等参数。以样品收缩转变温度，扫描电镜组织学检查，材料含水量分析，样品力学性能，体外胶原酶消化溶解试验来测定脱细胞真皮的交联程度。 结论: EDC和NHS的联合作用提高了对脱细胞真皮胶原的交联速率和交联程度，同时交联的材料有较好的柔韧性。体外试验表明在酶降解过程中可保留较高的抗张强度。 第三部分脱细胞真皮和异体巩膜在兔眼睑重建模型中的实验观察 目的:探讨脱细胞真皮和异体巩膜在修补兔眼睑睑板缺损中的转归过程和组织相容性。 方法: 取体重约2.5Kg的新西兰白兔16只，随机分成两组，在兔右下睑中央切除睑板约10×4mm，缺损区植入保存的兔脱细胞真皮和异体巩膜，术后观察植入区域的炎症反应，睑结膜能否在植入物表面生长，观察两种材料的成形性能。分别于术后1周，4周，8周及12周取出标本，作组织学及免疫组化检查。血液学检查观察抗体和CD4,CD8细胞的变化。 结论: 脱细胞真皮是一种较好的睑板组织替代物，具有一定的柔韧性，可任意剪裁，引起的免疫反应轻微，作为一种细胞外基质，可引导自身组织的胶原纤维长入。而异体巩膜植入后较快吸收的原因可能是由于存在较强的免疫和炎症反应。 第四部分脱细胞真皮在眼睑临床修复技术中的初步探讨 一、脱细胞真皮在眼睑原位重建术中的临床观察 目的:探讨脱细胞真皮作为睑板替代物在眼睑重建术中的临床效果方法1.研究对象：不同原因导致的眼睑缺损29例31只眼睑，男性19例，女性10例，年龄从12岁到47岁，平均32岁。化学烧伤19例，热烧伤8例，机械伤1例，先天性畸形1例。 2.手术方法: 离睑缘3mm平行全长切开皮肤，分离眼轮匝肌，将残留的睑板连带睑结膜中央剖开，分离穹隆部结膜使其松解，如有较多结膜缺损则在中间缝合一块羊膜或唇粘膜，将制作的脱细胞真皮浸入带抗生素的生理盐水中5分钟，基底膜面朝向眼球表面缝合于下方残留的睑板，修复上睑时将脱细胞真皮上缘与提上睑肌断端缝合，两侧与内外眦韧带缝合，然后将分离的眼轮匝肌覆盖于供体表面，如合并有眼睑前层皮肤缺损，则用游离的中厚皮瓣作荷包式缝合。 结果: 随访5-25个月，平均14个月。31只眼睑中，治愈18只睑(58％)，显效10只睑(32％)，改善3只睑(10％)，无手术失败者，以先天性眼睑缺损，机械伤及轻度眼睑烧伤的效果较好。 结论: 脱细胞真皮材料容易获得，避免了第二手术切口及缩短手术时间，经硬化处理的脱细胞真皮复水后具有较好的可塑性和弹性，另外光滑的基底膜面可使结膜上皮化快速进行。由于脱去了细胞成分，不仅引起的免疫反应很轻微，也大大减少了病毒寄宿的环境。在我们所做的短期临床观察中，脱细胞真皮可基本起到支撑眼睑后层的支架作用。 二、脱细胞真皮在疤痕性睑内翻中的临床观察 目的:探讨脱细胞真皮在疤痕性睑内翻中的治疗效果方法1.研究对象：不同原因导致的疤痕性睑内翻患者42例，其中男性24例，女性18例，年龄从11岁至68岁，平均年龄为36岁。其中热烧伤患者12例，化学伤患者20例，沙眼导致的疤痕性睑内翻10例。 2.手术方法：上睑的疤痕性矫正术为距睑缘3mm平行睑缘全长切开皮肤，向下分离睑板前的眼轮匝肌，充分暴露疤痕化的睑板组织。用刀片在睑板水平中线两侧各作-45°角的切口，尖端向结膜，底宽2～3衄，长度为睑板全长。用6-0可吸收线间断缝合睑板切口4～5针，用5-0丝线由皮肤切口下缘1mm处进针，出针后水平经过睑板切口上缘，由皮肤切口上缘出针，一般缝合5～7针。然后用用睑板夹或较大的霰粒肿央，将手术部位的睑缘夹紧固定，沿缘间灰线切开，其长度应略较倒睫范围较长，必须将所有的倒睫包括在内。先用尖刀片垂直切开缘间部灰线深约0.5～1.0mm，然后细心向深部分离，在灰线处将眼睑剖开为前后两层，深度约2～3mm。此时将脱细胞真皮切成底部宽为1mm的楔形条状物嵌入切开的睑缘前后唇之间。楔形脱细胞真皮底部形成新的睑缘，如果切口长度超过1cm，缘间切口应使用10-0尼龙线连续缝合以固定充填物。植入脱细胞真皮时不宜过深或过浅，过深则缘间切口张开效果较差，或切口很快重新愈合；过浅则植入物突出缘间部易脱落或引起眼部不适感。植入充填物底部应与缘问部处于同一水平为宜。术毕于眼部涂抗生素眼膏，约于术后10天可拆除10-0尼龙线。 结果: 随访期限为5个月至23个月，平均随访时间为9个月。在随访期间，按手术成功标准有74只眼睑恢复了正常的解剖位置，另外10例未达到预期目标，成功率为88％。失败的原因部分为由于需紧急保护角膜而在炎症期施行的手术，另外一个重要原因是失败的病例全部是重型的疤痕性睑内翻。 结论: 脱细胞真皮在治疗疤痕性睑内翻形成新的睑缘的优点是其组织相容性好，炎症反应轻，独特的基底膜结构可快速引导上皮的移行和生长。是一种较为理想的睑缘组织替代物。