【摘 要】
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猪胸膜肺炎(Porcine pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种接触性传染病.该文从广东省不同猪群中分离到3株APP野毒株(JH株
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猪胸膜肺炎(Porcine pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种接触性传染病.该文从广东省不同猪群中分离到3株APP野毒株(JH株、SJ株、DJ株),通过各种培养特性及凝集试验证明:JH株为血清1型APP,SJ株和DJ株为血清7型APP.apxⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,根据apxⅣA毒力基因3端的核苷酸序列设计合成了一对引物,建立了检测APP核酸的特异的PCR方法,该方法扩增片段大小为442bp.APP 1~10血清型标准菌株DNA为模板进行PCR扩增结果均为阳性,A型和B型多杀性巴氏杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎双球菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌及一些从猪肺脏分离到的细菌DNA为模板进行PCR扩增均为阴性,以上结果显示该论文建立的APP核酸PCR检测方法特异性较强.以血清1型APP的apxⅣA毒素基因(大小为442bp)的DNA片段为模板制备地高辛标记核酸探针.敏感性检测结果表明,该探针对APP DNA的最低检出量为1.8ng.特异性检测结果表明,该探针能与APP 1~10血清型标准菌株DNA抽提物发生特异性杂交反应,而与A型和B型多杀性巴氏杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎双球菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌及一些从猪肺脏分离到的细菌DNA进行杂交反应均为阴性.对杂交反应时间进行摸索发现杂交时间在10-20h效果最好.应用PCR方法及斑点杂交法对临床10份细菌分离阳性病料、31份细菌分离阴性但有纤维渗出性病料和36份细菌分离阴性且无纤维渗出性病料进行检测,结果阳性病料全部检出;对于31份细菌分离阴性但有纤维素性渗出的病料,PCR法检测出20份为阳性,斑点杂交检出14份为阳性;36份细菌分离阴性且无纤维渗出性病料PCR法及斑点杂交法检测均为阴性.
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