【摘 要】
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谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferases,GST)是生物转化II相反应的重要酶,主要负责催化外源物质与还原性谷胱甘肽(GSH)形成亲水性共轭物,再由ABC转运蛋白(ATP-bindin
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谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferases,GST)是生物转化II相反应的重要酶,主要负责催化外源物质与还原性谷胱甘肽(GSH)形成亲水性共轭物,再由ABC转运蛋白(ATP-bindingcassette transporter,ABC)泵出细胞外从而达到清除毒物和外源物质的目的,并在氧化应激过程中发挥重要作用。为揭示GST在贝体腹泻性贝毒(DSP)代谢解毒中的作用,本研究在实验室条件下,以利玛原甲藻(Prorocentrum lima)为DSP毒素的来源,通过实时荧光定量PCR(q PCR)分析了染毒后近江牡蛎(Crassostrea ariakensi)鳃和消化腺组织中GST-α、GST-ζ、GST-ω、GST-π、GST-μ、GST-ρ、GST-θ和微粒体GST(microsomal GST)m RNA表达的变化,采用酶联免疫法(ELISA)测定了五种GST亚型蛋白水平的变化,并分析了贝类鳃和消化腺组织中总GST活性的变化。进一步利用GST特异性抑制剂依他尼酸(ethacrynic acid),观察了GST活性受到抑制时贝类鳃和消化腺组织中O A含量、P-gp和MRP外排活性的变化。实验结果显示,在投喂2×105 cells/L利玛原甲藻之后,鳃组织中GST-π、GST-μ、GST-θ、GST-ζ和m GST m RNA表达水平显著上升,消化腺组织中只有GST-α和GST-ζ表达受到诱导。与m RNA表达变化相类似,GST蛋白水平的变化也存在差异,当利玛原甲藻密度为2×105 cell/L的情况下,鳃组织中GST-θ和微粒体GST的蛋白含量显著增加,当利玛原甲藻密度为20×105 cell/L时,GST-π蛋白含量显著增加。鳃组织中GST活性显著提高,但消化腺中GST活性并无明显变化。这些结果提示GST可能参与DSP毒素的代谢解毒,不同GST亚型在耐受DSP毒素的过程中的作用可能不同。加入GST特异性抑制剂依他尼酸后,与未添加依他尼酸的利玛原甲藻染毒组相比,鳃和消化腺组织中OA含量显著下降,P-gp和MRP外排活性显著提高,抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT的活性、丙二醛的水平并未发生明显变化,表明GST活性的抑制可改变DSP毒素在贝体中代谢过程,进一步说明GST在DSP毒素代谢解毒过程中发挥重要作用。
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