【摘 要】
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碱性磷脂酶A具有抗凝血、溶血、肝素结合和溶菌活性.为了确定其抗凝活性位点,我们用两步PCR定点突变技术,根据磷脂酶A的同源序列和晶体结构的推测,设计了四个突变体:E53G、W7
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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碱性磷脂酶A<,2>具有抗凝血、溶血、肝素结合和溶菌活性.为了确定其抗凝活性位点,我们用两步PCR定点突变技术,根据磷脂酶A<,2>的同源序列和晶体结构的推测,设计了四个突变体:E53G、W70M、T56K和D67K.为进一步讨论碱性磷脂酶A<,2>的抗凝活性与水解磷脂的酶活性之间的关系.用对溴苯甲酰甲基溴(p-BPB)以表在宾野生型碱性磷脂酶A<,2>的His残基进行化学修饰.我们推测碱性磷脂酶A<,2>发挥它的抗凝活性除了它的水解磷脂的酶活性外还在它与靶位点的结合能力有关.而它的靶位点可能为某一凝血因子或磷脂.蛇毒中存在一种蛋白质-节后神经毒素,又和突出后神经毒素.我们利用PCR的方法从中华眼镜蛇(Najanajaatra)毒腺中克隆到一个新的节后神经毒cDNA.命名为NL3.蚯蚓中存在的多种蚯蚓纤溶酶的同工酶.从威廉腔环蚓(Metaphireguillelmi)粗制品中经Sephadex、G-75DEAE-SepharoseCL-6B及两次MonoQ分离到蚯蚓纤溶酶Z,测定了它的N-端氨基酸序列,同时根据这个序列设计合成了一兼并引物.Western检测表明表达条带能与兔抗蚯蚓纤溶酶Z抗体结合.
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