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目的:1.研究电针单穴与配伍腧穴在治疗失眠症状的选穴规律:2.采用脑电监测用以评估失眠大鼠模型复制是否成功:3.探讨电针干预对失眠大鼠脑脊液中睡眠相关神经递质调节机制,研究电针单穴与配伍腧穴治疗失眠的疗效,为动物实验研究失眠神经生物学机制和临床针刺治疗失眠提供科学理论依据。方法:实验雄性SD大鼠共120只,按照随机方法进行分配。电生理组共60只大鼠,每组10只;非电生理组共60只,每组10只。其中电生理组与非电生理组组别相同都为6组,分别为正常组、模型组、神门组、百会组、三阴交组和神门-百会-三阴交组,其中神门-百会-三阴交组又称“三才穴组”。(1)电生理组在造模前要进行电极埋置手术。术后将大鼠置于自制的有机玻璃笼内适应性喂养一周,然后造模。(2)造模采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)方法复制失眠大鼠模型,1次/ld,连续2d。大鼠于第1次腹腔注射28～30h后,大鼠出现昼夜节律消失,白天活动频繁与空白对照组有明显不同,即为模型复制成功。(3)造模的第三天开始治疗,末次治疗结束后取材,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)靶标检测分析实验大鼠脑脊液中神经递质组胺、谷氨酸、多巴胺、5-羟色胺及其代谢物5-羟吲哚乙酸的浓度。结果:(1)PSG分析显示,与正常组大鼠相比,模型组大鼠在第4天的觉醒时间均显著延长(p<0.05),与模型组对比,治疗组大鼠的觉醒时间均显著减少(p<0.05),而且合穴组的觉醒时间显著少于其他三个治疗组(p<0.05)。(2)结果显示:模型组大鼠脑脊液中组胺、谷氨酸、多巴胺的终浓度均显著高于正常组(p<0.05),5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸的终浓度均显著低于正常组(p<0.05);与模型组相比,针刺神门穴显著降低了脑脊液中组胺、谷氨酸、多巴胺的浓度(p<0.05),针刺百会穴降低了谷氨酸、多巴胺的浓度(p<0.05),针刺三阴交穴后谷氨酸、多巴胺的浓度明显降低(p<0.05),针刺合穴(穴位配伍)后,谷氨酸和组胺的浓度均显著降低(p<0.05),而且组胺、多巴胺的浓度显著低于神门组、百会组和三阴交组(p<0.05);针刺神门穴、百会穴、三阴交穴和合穴均显著上调了脑脊液中5-HT和5-羟吲哚乙酸的浓度(p<0.05),而且合穴的效应明显高于三个单穴组(p<0.05)。结论:1.脑电图可以做为评估大鼠失眠模型复制的确切有效性指标。2.无论从神经递质方面还是电生理方面,可以发现电针可以有效调节大鼠失眠的症状。3.电针可有效降低大鼠脑脊液中促觉醒神经递质谷氨酸、多巴胺、组胺的含量,以及降低促兴奋神经递质5-HT、5-HIAA的含量,说明腧穴配伍调节失眠效果优于单穴,且腧穴配伍更加有效的起到了宁心安神,调节阴阳平衡的作用。