目的：探讨通过RNA干扰技术沉默mdr1基因对人白血病HT9细胞和胃癌SGC7901/ADM细胞多药耐药的逆转效果。 方法：针对mdr1mRNA序列设计合成3对编码shRNA的DNA模板序列，分别定向克隆到含有U6和H1启动子的质粒载体pSilencer2.1-U6neo和pSilencer3.1-H1neo上，构建6种表达shRNA的重组载体，电转染HT9细胞和SGC7901/ADM细胞，经G418筛选后制备转染细胞单克隆，经PCR扩增基因组DNA鉴定后扩大培养。通过RT-PCR和荧光定量PCR检测mdr1-mRNA的表达水平，Westernblot和免疫组化检测P-糖蛋白的表达水平，Rho123外排实验检测P-糖蛋白的转运功能，通过MTT法测定药物作用后的细胞存活率和在光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜下，以及琼脂糖凝胶电泳时，药物作用后细胞呈现的形态结构和生化特征，从而检测细胞耐药逆转效果。 结果：1.用pSilencer2.1-U6neo和pSilencer3.1-H1neo质粒成功构建了6种表达shRNA的重组载体，即p2.1-1、p2.1-2、p2.1-3、p3.1-1、p3.1-2、p3.1-3；2.重组载体成功转染HT9细胞和SGC7901/ADM细胞，获得了稳定转染的细胞单克隆；3.RT-PCR、荧光定量PCR、Westernblot和免疫组化结果显示，3对干涉片段(6种重组载体)均能不同程度地抑制HT9细胞和SGC7901/ADM细胞mdr1基因表达，干涉片段3的抑制作用优于干涉片段2和干涉片段1，U6启动子优于H1启动子；4.Rho123外排实验结果显示，6种重组载体转染的HT9细胞和SGC7901/ADM细胞P-糖蛋白的外排转运功能均有不同程度的降低；5.MTT检测结果显示，转染6种重组质粒的HT9细胞和SGC7901/ADM细胞对三尖杉酯碱、阿霉素、紫杉醇、姜黄素的敏感性均有不同程度的增强，耐药性均有不同程度逆转，其中，转染p2.1-3、p3.1-3重组质粒(带有干涉片段3)的细胞对药物的敏感性最强。6.在光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜下，以及琼脂糖凝胶电泳时，用三尖杉酯碱、阿霉素、紫杉醇、姜黄素作用后，转染p2.1-3、p3.1-3重组质粒载体(带有干涉片段3)的HT9细胞和SGC7901/ADM细胞呈现明显的凋亡特征。 结论：本研究设计的3对编码shRNA的DNA干扰片段所构建的重组载体均能转染HT9细胞和SGC7901/ADM细胞，并能不同程度抑制其mdr1基因的表达，逆转其耐药性。