前言 水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是近年来发现存在于哺乳动物细胞膜上的特异转运水的蛋白质,肺组织有六种(AQP1、AQP3、AQP4、AQP5、AQP8、AQP9),其中AQP1存在于支气管周围血管床和肺泡毛细血管内皮细胞。有研究显示:水通道在肺泡液体转运中起着重要作用,其中AQP1是肺血管渗透性的决定性因素。金葡菌α-毒素(α-Toxin)是金葡菌的主要致病因子,它可引起细胞渗透压的失衡,本研究的目的就是通过金葡菌α-毒素对BALB/c小鼠成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的影响,探讨α-毒素的致病机理与AQP1的关系。 材料和方法 一、材料 研究对象:BALB/c小鼠成纤维细胞株(BALB/c3T3) 实验试剂:MEM、胎牛血清、L-型谷氨酰胺、青链霉素、胰酶、金葡菌α-毒素、蛋白酶抑制剂、BCA蛋白分析试剂盒、一抗、二抗、ECL-plus、PVDF膜。 二、方法 1.加入α-Toxin:将小鼠成纤维细胞(BALB/c3T3)培养在MEM中,放在37℃含有5%CO2的孵箱中孵育,90%细胞单层融合时传代培养用于实验。将上述细胞分为对照组及实验组,实验组加入α-Toxin 30μg/ml刺激细胞4h、6h,于光镜下观察细胞形态的变化。然后收集细胞,加入裂解液吹打混匀,用紫外吸收法测定吸光值(OD值),计算样本的蛋白浓度。 2.AQP1蛋白的表达:应用Western-blot方法检测。