金丝草为禾本科属植物金丝草的全草,富含黄酮、酚酸类物质,具有抗氧化、抗炎、降糖等多种生物活性。但目前对金丝草的研究较少,对体内抗氧化活性的研究更是空白,为了明确金丝草的药理活性,本文对金丝草黄酮进行提取分离,成分分析,明确主要活性成分,并研究制备总黄酮,测定其体内抗氧化活性,从其抗氧化的角度揭示治疗2型糖尿病的机制(本课题组前期药理研究证明其降糖作用与所含黄酮类成分有关)。金丝草的化学成分分析研究。将金丝草乙醇提取物用不同溶剂分别萃取成三个不同极性的组分,对乙酸乙酯部位和正丁醇部位运用硅胶柱层析,ODS柱层析以及重结晶等手段进行分离,从而分离得到两个单体化合物。再根据其理化性质并运用UV、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC等波谱技术与文献报道对比鉴定,确定分离得到了化合物芹菜素、β-胡萝卜苷。采用分光光度法建立总黄酮含量测定的方法,测定不同极性部位的总黄酮含量。采用HPLC法建立测定主要黄酮成分芹菜素、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法,进行其含量测定。结果表明:正丁醇部位的总黄酮含量最高。芹菜素、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷在正丁醇部位含量分别为5.31 μg/mg、46.06μg/mg、96.26μg/mg。在乙醇提取物中的含量分别为1.57 μg/mg、16.88μg/mg、31.79μg/mg。利用大孔树脂富集金丝草总黄酮。以金丝草总黄酮含量为指标,优化富集工艺,结果:AB-8大孔树脂对金丝草总黄酮有较好的富集作用,最佳工艺条件为:上样药液浓度为1.5mg/ml,药液的上样体积为2倍柱体积,先以4倍柱体积的水洗涤,再用3倍柱体积的70%乙醇洗脱,洗脱流速为1.33ml/cm2·min。纯化后总黄酮相对含量可达到63.4%。D-半乳糖造衰老小鼠模型的体内抗氧化作用的研究。用纯化得到金丝草总黄酮有效部位分高、中、低剂量组,通过D-半乳糖衰老小鼠模型进行动物实验,考察金丝草各剂量组的体内抗氧化能力。结果发现小鼠血清、心脏、肝脏、肾脏、脑中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)活性均有不同程度地升高,脂质过氧化产生的丙二醛(MDA)含量也有所下降。