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TLP对肝脏细胞生长的影响作用研究TLP(TRAP-1-like_protein，TLP)是近年来发现的新基因，因其与TRAP-1有25％的同源性而命名为TRAP—1样蛋白。研究显示TLP在TGF-β／Smad信号转导通路中起调节作用，且它对Smad2／3的调节具有相反的作用：TLP的过度表达可抑制TGFβ诱导的SBE蛋白(Smad3／4特异性受体)的表达，却可加强ARE蛋白(Smad2／4特异性受体)的表达。TLP对Smad2／Smad3的这种特殊作用，对于TGF-β信号下传并表现出不同的生物学活性的功能可能具有重要意义，值得深入研究。本研究分为两个部分：第一部分为体内研究，收集肝癌患者的肝癌和癌旁组织，并将癌旁组织分为肝硬化组和非肝硬化组，比较TLP的mRNA水平差异，探索TLP与肝癌、肝硬化的相关性。第二部分为体外研究，采用实时细胞生长监测系统技术，动态实时观察TLP、Smad3基因被RNA干扰后，Lx-2细胞的生长情况，探索TLP与Lx-2细胞生长之间的关系。第一部分检测肝癌与癌旁组织中TLP、Smad2、Smad3的表达水平目的：通过比较肝癌与癌旁组织中TLP、Smad2、Smad3的mRNA水平差异，探索TLP与肝癌、肝硬化的相关性。方法：收集48例肝癌患者手术时的肝癌组织与癌旁组织，并根据病理诊断，又将癌旁组织分为肝硬化组与非肝硬化组。Trizol法提取每个样本组织中的总RNA，逆转录后，用实时荧光定量PCR系统检测肝癌组织和癌旁组织、肝硬化组织和非肝硬化组织中TLP、Smad2、Smad3的mRNA水平，选用β-actin作为定量内对照，HCCR作为阳性对照。结果：实时荧光定量PCR结果显示，与HCCR相类似(15.64±3.55 vs 13.27±3.47，p＜0.01)，肝癌组织的TLP mRNA水平显著高于癌旁组织(12.07±2.62 vs 11.03±1.57，p＜0.05)；48位患者肝癌组织与癌旁组织配对后，TLP的mRNA水平存在差异(1.05±3.06，P＜0.05)。Smad2与Smad3的mRNA水平在肝癌组织中较癌旁低(Smad2：7.64±2.61 vs 8.00±2.77；Smad3：5.76±1.95 vs 6.41±2.58，P＞0.05)，差异尚不具有统计学意义。癌旁的硬化组织与非硬化组织之间，TLP、Smad2与Smad3的mRNA水平均未发现明显差异(TLP：10.66±1.54 vs 11.68±1.34，P＞0.05；Smad2：7.93±3.03 vs 7.54±2.69，P＞0.05；Smad3：6.42±2.61 vs 6.16±3.08，P＞0.05)结论：TLPmRNA在肝癌组织中高表达，肝硬化组与非肝硬化组间未发现TLP的mRNA水平有明显差异，提示TLP与肝癌的发生有关。第二部分TLP、Smad3特异性RNA干扰对HSC细胞生长的影响目的：探索TLP、Smad3特异性RNA干扰对HSC细胞Lx-2细胞株生长的影响。方法：针对TLP和Smad3的基因序列，分别设计两个siRNA序列，即TLP-1、TLP-2、Smad3-1、Smad3-2，用于对Lx-2进行RNA干扰。以GAPDH的RNAi序列作为阳性对照(+)、non-silencing无关对照作为阴性对照。通过实时细胞生长监测系统技术，动态实时观察RNA干扰后细胞的成长状态。结果：RNA干扰后，细胞伪足明显减少或消失，形态由多边形改变为椭圆形，与阴性对照相比，各实验组的细胞增殖显著受到抑制，尤其是TLP-1、TLP-2、Smad3-2，受抑制程度接近阳性对照GAPDH组，通过重复测量资料方差分析，各处理组与阳性对照组一样，与阴性对照组之间的细胞指数差异均有显著意义：(GAPDH组：F值40.64，P＜0.01；TLP-1组：46.82，P＜0.01；TLP-2组：F值52.76，P＜0.01；Smaad3-1组：F值113.97，P＜0.01；Smad3-2组：F值59.25，P＜0.01)。结论：TLP基因的过低表达对肝星状细胞的生长起抑制作用，TLP可能具有促进HSC生长的作用。