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失眠是一种常见的精神疾病,长期失眠会严重影响到人们正常生活及工作。临床治疗失眠常用药物以苯二氮卓类为主,但易引起一系列不良反应。中医中药以其标本兼治、疗效可靠、不良反应少等特点在治疗失眠的临床应用中具有明显优势。酸枣仁-丹参为中医临床上的常用药对,用于治疗心肝血虚所致失眠。本文以酸枣仁-丹参为研究对象,采用LC-ESI-MS/MS方法,考察丹参对酸枣仁中主要成分药代动力学行为及组织分布的影响,在此基础上,采用P糖蛋白抑制剂及单体配伍探讨酸枣仁-丹参配伍机制。该结果可为酸枣仁-丹参的临床应用提供参考。本文内容及结果包括:1、建立同时测定酸枣仁-丹参醇提液中斯皮诺素、丹参酮I及丹参酮IIA含量的HPLC方法。结果显示,斯皮诺素、丹参酮I及丹参酮IIA线性范围分别为20-500 μg/mL、48-1200μg/mL、48-1200 μg/mL,R2>0.999,加样回收率>93%,精密度、稳定性及重复性的RSD<2%,符合中药成分检测要求。2、建立测定大鼠血浆及组织样品中斯皮诺素LC-ESI-MS/MS方法。方法学考察结果显示,血浆及组织中内源性物质对斯皮诺素的测定未见干扰,日内、日间精密度及稳定性的RSD均小于15%,提取回收率均大于89.83%,基质效应在88.06%-98.33%间,符合生物样品的检测要求。3、采用药代动力学方法对酸枣仁-丹参配伍机制进行研究。结果发现,与酸枣仁相比,配伍丹参后斯皮诺素AUC(0-t)和Cmax显著增加(P<0.01),V1/F:显著减小(P<0.05)。与斯皮诺素单体相比,分别配伍丹参、丹参酮I及维拉帕米后斯皮诺素AUC(0-t)显著增加(P<0.01);配伍丹参酮IIA后斯皮诺素V1/F显著增加(P<0.001)。与斯皮诺素-维拉帕米相比,斯皮诺素配伍丹参酮I后斯皮诺素AUC(0-t)和Cmax显著增加(P<0.001),Tmax显著减小(P<0.001)。结果表明,丹参中的丹参酮I通过抑制影响斯皮诺素口服吸收的p-gp,促进酸枣仁中斯皮诺素入血,提高斯皮诺素生物利用度。4、通过组织分布对酸枣仁-丹参增效机制进行研究。结果发现,与酸枣仁相比酸枣仁-丹参后斯皮诺素在心、脑及肝、肺分别在0.5 h内及2-6 h内浓度显著升高(p<0.001),提示丹参中可能存在影响斯皮诺素分布的活性成分。与斯皮诺素相比,配伍丹参酮IIA,心、肝及脑中斯皮诺素浓度均在0.25 h、0.5 h显著增加(P<0.001);配伍丹参酮I后斯皮诺素在不同组织中可检测的浓度较低(P<0.05)。结果表明,丹参增强酸枣仁治疗心肝血虚所致失眠作用的原因可能与丹参中丹参酮IIA显著促进酸枣仁中斯皮诺素入心、肝、脑等组织有关。