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世界范围内,胃癌是排名前五位的高发恶性肿瘤,亦是肿瘤致死的前三位病因,给全球人类造成了严重的社会卫生健康负担。而我国,地处东南亚区域,是全球范围内胃癌高发区域,现患病人多,确诊即进入进展期的病人比例高,导致胃癌诊疗在我国存在困境,治疗效果欠理想,给我国人民健康造成了巨大的影响,增加社会卫生保健负担。目前,根据国际通行的NCCN指南,胃癌诊疗以手术、化疗、放疗为主,术前、术后化疗是胃癌诊治过程中的重要诊疗手段。紫杉醇作为胃癌有效化疗药物之一,临床应用广泛,但因其化学特性、制剂类型等原因,其应用过程中出现急性过敏、严重骨髓抑制等并发症、副作用风险较高。如何改善紫杉醇剂型,提高疗效,降低毒副作用方面,研究者一直在不断努力。近年来,随着生物膜药物载体研究进展,包括红细胞膜、白细胞膜等自体生物细胞膜被研究开发应用于荷载传统化疗药物,显示出独特的优势。其中,红细胞膜载体被证实能够协助药物躲避机体内网状系统对药物的快速清除,延长药物在机体内的循环时间,且其来源充足、易于获得,因而备受研究者们青睐。目的:探讨应用红细胞膜荷载紫杉醇制备纳米粒子,进一步应用具有肿瘤靶向性的独立自主设计、提纯的融合蛋白anti-EGFR-i RGD对纳米粒子进行修饰,构建具有肿瘤靶向性投递紫杉醇的自体红细胞膜纳米载药体系,评估其肿瘤靶向能力、体内外抗肿瘤作用。方法:采集新鲜外周血,分离、洗涤红细胞,低渗破膜法提取红细胞膜,制备红细胞膜囊泡,再行应用囊泡包裹紫杉醇溶液,经脂质体挤出器物理推挤制备载紫杉醇红细胞膜纳米粒（RBCm-PTX）。制备后,应用动态光散射、透射电镜等对RBCm-PTX进行表征,观察其体外稳定性;应用高效液相质谱检测RBCm-PTX包封率、载药量以及其体外释放情况;将DSPE-PEG-Mal与anti-EGFR-i RGD通过迈克尔加成反应相连接,形成亲脂性linker,再行经37℃孵育将脂质linker插入载紫杉醇的红细胞膜纳米粒子中红细胞膜的脂质双分子层,制备anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX纳米粒子,将其后续应用于体内外实验。常规培养人MKN45细胞系,通过MTT检测anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX纳米粒对MKN45细胞的体外抑瘤作用。建立MKN45皮下瘤动物模型,通过监测实验动物体重、皮下瘤大小评估anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX体内抑瘤作用,通过近红外活体成像系统了解anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX活体内药物分布及其体内肿瘤靶向性,通过解剖实验动物重要内脏器官评价anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX的体内生物安全性。结果:（1）成功制备RBCm-PTX纳米粒子。动态光散射分析显示,RBCm-PTX平均粒子大小约168.7±2.2nm,多分散指数（PDI）0.200±0.002,包封率约60.00%,载药量34.07%,透射电镜下,可见RBCm-PTX粒子呈圆形、类圆形,大小较均一,体外稳定性研究显示,RBCm-PTX纳米粒体外可稳定存在约8天。（2）anti-EGFR-i RGD与DSPE-PEG-Mal经迈克尔加成反应成功连接,获得DSPE-PEG-anti-EGFR-i RGD。蛋白电泳显示,纯化后的anti-EGFR-i RGD与DSPE-PEG-Mal纯品反应后,胶内出现新的可被考马斯亮蓝染色的条带,该条带位于anti-EGFR-i RGD纯品上方。（3）成功制备anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX纳米粒子。对其进行表征显示,anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX平均粒子大小约171.7±4.7nm,多分散指数（PDI）0.214±0.005,透射电镜下可见RBCm-PTX粒子呈圆形、类圆形,大小较均一,体外亦可稳定约8天。（4）体外抗肿瘤研究显示,RBCm-PTX、anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX体外可杀伤人胃癌MKN45细胞。MTT结果显示,PTX体外抑制MKN45细胞增殖的半数致死剂量IC50约5.1ng/m L,RBCm-PTX、anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX均可在体外显著抑制MKN45细胞的增殖,且其各浓度抑制作用与裸药紫杉醇相仿,无统计学差异,P>0.05。（5）建立MKN45裸鼠皮下瘤模型,用于纳米粒体内分布、肿瘤靶向性研究。结果显示:荷瘤动物经尾静脉注射相应药物后,约2h在皮下瘤部位,anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX组荷瘤动物可在近红外活体成像仪所采集图像上见到移植瘤局部近红外荧光信号,注射后24h、48h分别采集信号,该组仍可见移植瘤局部荧光信号聚集,而上述相同时间点,RBCm-PTX组、anti-EGFR-i RGD联合RBCm-PTX给药组皮下瘤区域均未见明显荧光信号增强。同时,在实验动物心脏、肝脏、脾脏、肾脏亦可见近红外荧光信号存在。（6）体内抑瘤实验结果显示:对照组、PTX组、RBCm-PTX组、anti-EGFR-i RGD联合RBCm-PTX组、anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX组皮下瘤瘤重依次为:0.78±0.24g,0.46±0.17g,0.33±0.09g,0.24±0.05g,0.13±0.07 g（n=5）。anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX组皮下瘤瘤体积389±72 mm3,小于对照组（1006±145 mm3）、单纯PTX组（793±73 mm3）、RBCm-PTX（673±52 mm3）、anti-EGFR-i RGD联合RBCm-PTX（607±66 mm3）（n=5）,统计学差异明显（P<0.05）。相较于对照组,各组皮下瘤体积分别缩小了61%、21%、33%、40%。实验动物内脏器官,包括心、肝、脾脏、肺、肾苏木精-伊红染色（H&E染色）结果显示,anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX组上述器官较对照组未见明显病理学组织改变,初步显示anti-EGFR-i RGD-RBCm-PTX纳米粒子具有体内安全性。结论:本研究成功制备了红细胞膜载紫杉醇纳米粒子、anti-EGFR-i RGD修饰的红细胞膜载紫杉醇纳米粒子。本研究结果显示,红细胞膜载紫杉醇纳米粒子、anti-EGFR-i RGD修饰的红细胞膜载紫杉醇纳米粒子大小较均一、分散性良好、体外稳定性可,且对MKN45皮下瘤靶向性显著提高,同时体内、外均具有良好的肿瘤抑制作用,结合其制备工序的简单易操作、所需试剂安全性、可行性,考虑具有潜在的临床应用价值。