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目的探讨不同浓度2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)对雄性SD大鼠睾丸间质细胞(Leydig cell)凋亡的影响及其作用机制。从而探讨TCDD生殖毒性的可能机制,为预防相关性疾病提供理论依据。方法取8-10周龄的性成熟期SPF级雄性SD大鼠,在屏障环境下饲养2周后,进行了睾丸间质细胞分离培养以及细胞鉴定。通过建立的睾丸间质细胞体外培养模型,利用生长状态较好的第三代leydig细胞进行体外实验。根据TCDD作用浓度,本实验共分为5组:0 n M组(即对照组)、1 n M组、5 n M组、10 n M组以及50 n M组。采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察不同浓度TCDD组别处理大鼠睾丸间质细胞24h对细胞增殖的影响;利用荧光探针DCFH-DA对细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平进行检测;Annexin V-FITC/PI染色法联合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况;采用Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3表达水平的变化。运用RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3 m RNA表达的变化。结果通过3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)结果显示,细胞均被染成蓝黑色,说明该方法分离leydig细胞纯度较高。MTT结果显示,随着TCDD的浓度增加,leydig细胞吸光度值呈逐渐下降趋势(P<0.05),并呈一定的剂量效应关系。ROS结果显示,随着浓度的增加,细胞内ROS水平呈上升趋势(P<0.05)。显微镜下观察,随着染毒剂量的增加,细胞凋亡阳性信号比率也逐渐上升。蛋白印记(Western blot)结果显示,与对照组相比,5、10、50 n M染毒组大鼠睾丸间质细胞Bax、Caspase-3蛋白相对表达量明显增加,而Bcl-2蛋白水平随TCDD浓度增加呈降低趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果与Western blot结果一致,随着浓度的增加Bax、Caspase-3 m RNA水平呈逐渐上升趋势,而Bcl-2水平随TCDD浓度的增加呈下降趋势,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论TCDD能抑制大鼠睾丸间质细胞的增殖而诱导其凋亡,并增加细胞内ROS含量。其诱导凋亡调节机制可能是通过上调促凋亡蛋白Bax表达,下调抑凋亡蛋白Bcl-2表达,进而激活Caspase-3蛋白的表达,导致大鼠睾丸间质细胞凋亡。长时间染毒对凋亡的影响以及是否存在其他凋亡因子的调节需进一步的研究。