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新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的禽类急性高度接触性传染病之一,以消化道和中枢神经系统损伤为主要特征,我国农业部将其归列为一类动物疫病。NDV属于禽I型副黏病毒,编码6种结构蛋白(3’-NP-P-M-F-HN-L-5’)和2种非结构蛋白(V蛋白和W蛋白),感染宿主比较广泛,给我国及世界养禽业造成严重经济损失。至今在全球范围内共发生了四次新城疫大流行,给养禽业带来了巨大的经济损失,严重影响了禽及禽类制品的国际贸易。尽管通过NDV疫苗的使用大大减少了ND大范围的暴发,但用NDV疫苗免疫过的鸡场中也会有野毒株的分离,并且导致发病鸡以非典型新城疫症状为主,这给ND的防控造成了新的困难,因此需要寻找更为有效的防控途径。实验室前期通过建立鸡与鸡胚感染模型,获得转录组数据,分析差异表达基因,选择上调明显的chEPSTI1,对此进行抗病毒研究,主要结果如下:(1)鸡源EPSTI1在同一物种保守性良好,主要氨基酸功能域有较好的同源性:对扩增chEPSTI1进行序列特征分析并构建生物遗传进化树,随着物种亲缘关系的疏远序列同源性降低,在关键蛋白功能域具有一定保守性。(3)体内外NDV感染均可诱导chEPSTI1的表达:转录组数据显示在感染NDV的鸡胚及4周龄SPF鸡法氏囊中表达量增加,NDV感染CEF/DF-1可以从细胞实验中验证这一结论,对此可认为chEPSTI1可以参与宿主免疫调节。(4)chEPSTI1能有效抑制NDV复制:构建重组质粒p CMV-chEPSTI1-3HA转染鸡源细胞,过表达后噬斑检测活毒有显著下降,Western blot验证病毒蛋白HN表达量减少;转染si RNA干扰内源chEPSTI1有助于NDV复制,由此证明该分子有良好的抗NDV活性。(5)chEPSTI1能够凭借线粒体凋亡通路促进感染细胞凋亡实现抗病毒:流式细胞术筛选凋亡细胞,过表达chEPSTI1促进NDV诱导凋亡;与之对应,转染干扰RNA表达凋亡细胞统计数据下降;RT-q PCR检测线粒体凋亡通路的标志分子,结果发现促凋亡因子上调,抑凋亡下调,提示chEPSTI1可以激活内源线粒体通路促进凋亡,抑制病毒复制。(2)chEPSTI1在鸡体多个组织均有分布,重点分布于消化系统及呼吸系统等经典NDV常发病灶:建立chEPSTI1组织表达谱,管家基因28S为内参,RT-q PCR检测11个组织样中chEPSTI1表达水平以及病毒载量,并对照NDV攻毒组,可以看出在出现典型症状的组织中表达量有所增加。综上所述,鸡源EPSTI1具有与其他物种中该分子相同的抗病毒功能,是天然免疫中重要效应因子,并且分布广泛;NDV感染后可以诱导该分子的表达,DF-1细胞过表达chEPSTI1真核重组质粒能够激活线粒体凋亡通路从而有效抑制NDV复制。