论文部分内容阅读
目的:制备99Tcm-人类表皮生长因子受体2(HER2)小分子多肽,分别从体内外水平探讨其作为HER2受体阳性乳腺癌分子显像剂的可行性。方法:1.99Tcm-TP1623的制备及其鉴定:化学合成及修饰得到小分子多肽TP1623,氯化亚锡还原法行99Tcm标记TP1623,纸层析法分离各标记产物组分,测定出标记率,计算比活度,并运用纸层析法测定不同时相的放化纯,鉴定其体外稳定性。2.99Tcm-TP1623体外细胞结合活性的鉴定:采用细胞免疫组化法检测人乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-231的HER2受体表达水平、受体饱和实验和竞争抑制实验鉴定99Tcm-TP1623的体外细胞结合特性。3.HER2高表达及HER2低表达的乳腺癌荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定:分别建立HER2高表达及HER2低表达乳腺癌荷瘤裸鼠模型,并取肿瘤组织行病理及免疫组化分析,验证肿瘤及其HER2受体表达情况。4.99Tcm-TP1623的荷瘤裸鼠动态显像和竞争抑制显像研究:经HER2高表达乳腺癌裸鼠尾静脉注射99Tcm-TP1623后行SPECT显像,计算肿瘤与对侧软组织的T/NT比值,并与HER2低表达的荷瘤裸鼠显像相对比。3天后行竞争抑制显像:预先注射500倍非标多肽,1h后注射99Tcm-TP1623,以相同条件和方法进行SPECT显像,探讨99Tcm-TP1623与活体肿瘤结合的活性和特异性。结果:1.标记产品99Tcm-TP1623的鉴定:99Tcm-TP1623标记率为(97.39±0.23)%,比活度为(24.61±0.06)TBq/mmol,室温下放置0h、2h、4h、6h后放化纯度分别为(97.39±0.23)%、(94.66±1.49)%、(93.28±1.08)%、(93.25±0.06)%,在血清中放置0h、2h、4h、6h、24h后放化纯分别(97.14±0.45)%、(93.36±1.78)%、(92.81±0.32)%、(90.57±0.67)%、(86.02±1.34)%。2.99Tcm-TP1623体外活性的鉴定:细胞免疫组化法验证SKBR3细胞与MDA-MB-231细胞的HER2受体表达分别呈高表达和低表达水平。体外受体分析实验显示99Tcm-TP1623依然保持与HER2受体特异性结合的特点。3.HER2高表达及HER2低表达的乳腺癌荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定:分别建立乳腺癌SKBR3及MDA-MB-231肿瘤细胞的荷瘤裸鼠模型,肿瘤组织病理切片行HE染色,结果示两种荷瘤裸鼠肿瘤组织均见肿瘤细胞异形性明显,病理性核分裂象增多;肿瘤组织免疫组化分析,结果示SKBR3组和MDA-MB-231组的肿瘤HER2受体表达分别呈高表达和低表达水平。4.99Tcm-TP1623荷瘤裸鼠的SPECT动态显像和竞争抑制显像研究:99Tcm-TP1623可靶向浓聚于HER2高表达的SKBR3肿瘤组织,主要从泌尿系统排泄,其在HER2低表达裸鼠MDA-MB-231肿瘤内始终未见明显显影;预先注射500倍非标多肽1h后对HER2高表达的荷瘤裸鼠再进行显像,原肿瘤高浓聚影消失,表明99Tcm-TP1623能与HER2高表达的荷瘤裸鼠肿瘤组织特异性结合。结论:1.本研究制备出标记率及比活度高、体外稳定性好,依然保持与HER2受体高亲和力、特异性结合的99Tcm-TP1623,其制备方法简便,经济,易于后期制作一步法冻干试剂盒供临床应用。2.99Tcm标记TP1623可迅速与HER2高表达的乳腺癌组织高度特异性结合,肿瘤显影清晰,T/NT比值高,99Tcm-TP1623经HER2受体介导与肿瘤组织结合,是一具有潜在应用价值的HER2受体阳性肿瘤分子显像剂,此研究未见国内外文献报道。