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轮状病毒是在世界范围内引起五岁以下儿童和幼畜严重腹泻的病原之一,其每年造成大量的人员及经济动物的死亡。在我国因猪轮状病毒(Porcine rotavirus, PoRV)引起的仔猪腹泻,给养猪业造成严重经济损失。本研究克隆PoRV OSU株的VP6蛋白基因至pMD-18T载体进行测序。以测序正确的重组质粒为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增VP6基因,然后分别克隆至原核表达载体pET-30a和pGEX-6P-1,而后转化至感受态细胞,构建得到三个重组菌株VP6-pET-30a/Transetta(DE3), pET-30a-VP6/Transetta(DE3)和pGEX-6p-1-VP6/BL21.用IPTG对这三种重组菌株进行诱导表达,分别得到融合蛋白VP6-His. His-VP6和GST-VP6.之后对三种蛋白进行纯化鉴定,SDS-PAGE和Western blot结果显示三种重组蛋白的分子量与预期大小相符并且均能与PoRV阳性血清发生反应。分别用纯化得到的VP6-His和His-VP6免疫BALB/c、鼠。采用传统淋巴细胞杂交瘤技术制备得到11株稳定分泌抗VP6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1E5、1F4、2E2、2H11、4H2、4C8、4G8、5F6、4D11、2G9、6F5。抗体亚类鉴定结果显示1E5和4C8两株杂交瘤细胞分泌的抗体亚类为IgG2b型,其余9株为IgG1型。11株杂交瘤细胞培养上清及诱生腹水效价最高分别达到1：25600和1:106。间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot试验结果显示这11株MAb均能识别天然的VP6蛋白并且特异性良好。对VP6蛋白进行截短表达,应用Western blot试验初步确定所获得的的MAb识别的抗原表位区域,其中2G9与1F4识别表位相同,1E5、2E2和4H2识别表位相同。根据初步确定的抗原表位区域,进一步截短表达VP6,应用相同的方法确定2H11识别抗原表位6SLSKTLKDARDKIVE20,6F5识别抗原表位96CMDEMARESQRNGIA110,1E5、2E2和4H2识别抗原表位302PAVANLFPQ310,4G8识别抗原表位361FPPGMNWTELIT372。另外合成多肽段,应用间接ELISA检测确定MAb1F4和2G9对应的抗原表位核心序列为134DYIENWNLQNR144。本研究共得到11株稳定分泌抗轮状病毒VP6蛋白的MAb,并且鉴定出5个VP6蛋白的抗原表位,为进一步研究VP6蛋白的功能和建立轮状病毒诊断方法奠定了基础。