梨是原产于我国的重要果树,其资源丰富,种类品种繁多,需要在遗传上进行分类鉴定和亲缘关系探讨。应用AFLP分子标记技术对梨种质鉴定尤其是优良类型和品种的鉴定已成为育种的基础和发展生产的前提。DNA分子标记的出现为在DNA分子水平上鉴定梨品种提供了强有力的工具,AFLP(扩增片断长度多态性)多态性强,谱带非常丰富且清晰可辨,试验结果稳定性、重复性好,因此AFLP是迄今为止最有效的分子标记。本研究应用AFLP标准化反应体系,对梨属73个品种进行了AFLP分析,构建了它们的指纹图谱,并对其遗传多样性进行了分析。主要研究结果如下: 1.改良CTAB法是适合梨基因组DNA的提取方法,该法得到的DNA浓度大,基本无降解,蛋白质、多糖和RNA去除彻底,满足AFLP银染技术对DNA的要求。 2.用M1/E2、M3/E5等8对引物对73个梨品种进行扩增,共扩增出447条谱带,其中多态性谱带376条,多态性比例为84.12%;其余71条谱带为所有材料所共有,比例为15.88%。从供试品种的欧式距离来看,73个梨品种的欧式距离介于6.93-14.66之间,这些结果从DNA水平上反映了梨基因型间存在着相对较为丰富的遗传多样性。 3.构建了73个供试梨品种的指纹图谱,其中引物组合M3/E5对茄梨,引物组合M5/E2对中梨1号,引物组合M5/E1对八月红、龙香均具有独有的特征带,具有特征带的品种占供试品种的5.48%。通过二岐分类法,文山红雪梨、崇化大梨、鸭梨、甘川、金华早、汉源大白梨、洋梨、八云、红枝母秧、S6、海棠酥、多磨、丰水、赞皇杜梨、安梨均可以确定各自在AFLP图谱中的差异带,占供试品种的20.55%。根据样品的特征带或差异带可区分开所有供试样品。 4.对供试材料的遗传多样性进行分析,建立了梨的AFLP亲缘关系树状图,将73个供试梨品种分成两大类群(AGⅠ和AGⅡ),AGⅠ类群分成两个亚类群AGⅠ-1和AGⅠ-2,AGⅡ类群可分成两个亚类群AGⅡ-1和AGⅡ-2。亲缘关系树状图揭示了四大栽培系统之间的亲缘关系:白梨系统与砂梨系统亲缘关系最近,然后是秋子梨系统,与西洋梨系统亲缘关系最远。 5.AFLP具有稳定性好、重复性强、分辨率高等优点,所以虽然AFLP有不足之处,即较高的费用和操作技术难度,用于梨品种指纹分析具有一般分子标记所不可比拟的优势。