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猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为特征的传染病,对养猪业危害严重。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵害免疫系统并且易发生变异,常规的疫苗难以产生理想的效果,所以,研制安全有效的基因工程疫苗具有重要的意义。
本研究将表达PRRSVGP5蛋白的DNA重组质粒pCI-GP5分别与表达猪IL-2和IL-4的重组质粒(pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4)联合免疫25头健康仔猪,经三次免疫后宰杀部分猪只,通过质粒残留试验、染色体整合试验、抗双链DNA(dsDNA)抗体检测和质粒在环境中释放的可能性试验,综合评价DNA疫苗的安全性;同时人工感染PRRSVHB-2株,检测仔猪的体液免疫以及攻毒保护性反应,评价pCI-GP5的免疫效力及pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4的免疫佐剂效应。
安全性检测结果表明,DNA疫苗免疫仔猪后不会引起病理性损伤;通过PCR方法检测重组质粒在猪体内的残留及分布,结果三免后15天在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和注射部位肌肉等组织器官中能检测到目的片段,第42天阳性组织检出率明显减少;重组质粒不与宿主细胞染色体整合;免疫后也不产生抗dsDNA抗体;并且未在环境中发生扩散。
免疫效力检测证实,pCI-GP5可诱导免疫猪产生抗GP5抗体,ELISA抗体效价最高可达1∶285,中和抗体效价达1∶19。三免后攻毒,组织中PRRSV核酸的检出率下降30.3%,与对照组相比差异显著(p<0.05)。pcDNA-IL-2与pCI-GP5联合免疫后,可将中和抗体效价提高到1∶24.5;病毒血症的出现频率减少38.9%,PRRSV阳性组织检出率下降28.8%,与对照组相比差异显著(p<0.05);pcDNA-IL-4与pCI-GP5联合免疫后,ELISA抗体效价最高可达1∶320,中和抗体效价可达1∶24.1。病毒血症的出现频率下降38.9%,PRRSV阳性组织检出率减少34.8%,与对照组相比差异极显著(p<0.01)。
本研究初步证明PRRSDNA疫苗pCI-GP5在仔猪体内及环境中是安全的,pCI-GP5对猪的免疫保护力稳定,真核表达的猪细胞因子pcDNA-IL-2与pcDNA-IL-4能够显著增强pCI-GP5的免疫保护力,以上研究为该疫苗用于猪群临床研究提供了详实的数据。