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目的构建编码大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)的腺病毒载体,观察其对大鼠恶性胶质瘤的生长和微血管生成的抑制作用。方法(1)由前期克隆的pGM-T-rHSG质粒中酶切rHSG基因片段,亚克隆入pShuttle-CMV-EGFP重组穿梭载体中;而后与腺病毒骨架质粒pAdxsi酶切连接,经过抗性筛选及酶切鉴定得到阳性的pAdxsi-GFP-rHSG重组质粒;(2)pAdxsi-GFP- rHSG质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒,并进行鉴定。(3)大鼠C6胶质瘤动物模型采用大鼠尾状核立体定向注射法制作,接种C6细胞后第4、第11天瘤体内分别注射生理盐水(A)、Adv–rHSG–GFP(B)、Adv–GFP(C),测量肿瘤体积及抑瘤率。(4)通过免疫组化测定PCNA, rHSG和MVD,通过RT-PCR、Western-blot测定重组腺病毒介导的目的基因在体内的表达。结果(1)构建出了介导大鼠增殖抑制基因的腺病毒载体pAdxsi-GFP- rHSG,且对胶质瘤细胞有较高感染效率。(2)B组肿瘤体积与A组及C组相比明显缩少,有显著性差异( P<0.01)。(3) CD34免疫组化法瘤体内注射重组腺病毒,可使肿瘤组织微血管密度减少,B组与A组及C组相比最为明显,有显著性差异( P<0.01)。(4)RT-PCR示rHSG mRNA在A组9、15、21天,rHSG mRNA的相对表达量分别为12.63±1.83、10.42±2.25、6.95±1.18,B组在9、15、21天,rHSG mRNA的相对表达量分别为20.15±1.80、50.08±1.48、35.37±2.52,C组在9、15、21天,rHSG mRNA的相对表达量分别为12.65±2.04、10.10±2.04、7.95±0.97,B组不同时相rHSG mRNA表达都明显上调,以15天表达最高,B组与A组及C组相比最为明显,有显著性差异( P<0.01)。(5)Western Bloting法测定rHSG蛋白表达在A组9、15、21天,rHSG mRNA的相对表达量分别为73.77±2.70、56.72±5.12、43.52±1.81,B组在9、15、21天,rHSG蛋白表达量分别为73.06±2.99、117.82±5.37、94.02±1.45,C组在9、15、21天,rHSG蛋白表达量分别为75.09±2.834、53.15±2.60、42.06±3.02,B组不同时相蛋白表达都明显上调,以15天表达最高,B组与A组及C组相比最为明显,有显著性差异( P<0.01)结论结论成功构建介导大鼠增殖抑制基因的腺病毒载体pAdxsi-GFP- rHSG。Adv–rHSG–GFP可将rHSG基因导入肿瘤大鼠体内,并高效的表达,抑制肿瘤血管的增生及细胞增殖。