控制哺乳动物性别以生产更多期望性别的后代,对于提高畜牧业的生产效益、推动基础研究发展具有十分重要的理论和实践意义。人们往往通过调控性别决定基因、分离X、Y精子、鉴定胚胎性别与选择性移植、选择性妊娠、控制环境因子等途径来实现性别控制,其中X、Y精子分离是最直接、最有效的方法而倍受重视。对于性精子的分离方法,国外国内已在牛、羊、兔等动物进行了大量的研究,包括浮游法、电泳法、密度梯度离心法、Percoll法、免疫法、层析法。截至目前,其准确性和可重复性并没有得到证实。自流式细胞仪问世以来,政府和社会投入了大量的人力、物力、财力于流式细胞仪分离X、Y精子的研究中,其分离准确率达到80-90%,是目前X、Y精子分离准确率最高的方法。但是,流式细胞仪存在价格昂贵,技术要求较高、分离效率低下,染色过程中可能对精子造成危害等缺陷,制约了它在生产中的应用。因此,充分利用X、Y精子的生理特性,探索便宜、实用、安全、有效的X、Y精子分离新方法成为科研和生产中的迫切要求。本研究应用酸诱导结合王氏管分离法对X、Y精子进行分离,在此基础上进行分离精子的鉴定、液氮冷冻保存、体外受精及胚胎性别鉴定试验,为哺乳动物性别控制开辟一条新路。以家猪精液为实验对象,在酸诱导条件下结合王氏管分离法对X、Y精子进行分离、喹吖因染色法鉴定分离精子,显微镜下观察分离效果;将分离后的精液用液氮进行冷冻保存,探索分离后精液的保存方法及分离精子的抗冻性能;分离后的精子与成熟卵母细胞进行体外受精,检测分离后的精液的受精能力和受精卵发育能力;对分离精子受精后的胚胎进行性别鉴定,判断分离效果。通过以上实验,获得如下结果。1.酸诱导结合王氏管分离X、Y精子时,分离液pH值为5.5较适宜,X、Y精子分离效果较好,分离后精子活率提高了11.9%(95% VS 85%,P<0.01);分离后X精子的比例为72.6%,Y精子比例为27.4%,较自然状态下X、Y精子各占50%的比例差异极显著(P<0.01)。酸诱导下的王氏管分离法是X、Y精子分离的简单、有效方法。2.分离精液解冻后,精子活率、顶体完整率、质膜完整率、正常染色质率优于对照组(P<0.01),冷冻前优于冷冻后(P<0.01);分离能提高精子正常形态率(P<0.01),但冷冻前后正常形态率差异不显著(P>0.05);精子密度在分离及冷冻前后变化均不明显(P>0.05)。分离后的精液可用于冷冻保存,并且具有良好的抗冻性能。3.体外受精试验中,分离对精子穿卵率没有影响(P>0.05)。试验组单精入卵率、卵裂率、囊胚形成率较对照组分别提高20.3%、13.0%、8.9%(P<0.01)。表明精液经过分离后,对改善体外受精效果、促进胚胎发育产生了积极作用。4. PCR法(SRY为扩增基因)鉴定分离精子体外受精后的桑椹胚和囊胚,雌性胚