【摘 要】
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以氟比洛芬乙酯为唯一碳源,经过富集培养从土壤分离到60多株具有立体选择性水解氟比洛芬乙酯的微生物,其中NH33和C71号菌株的活性高而且选择性最好,鉴定为P.putida NH33和B.C
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以氟比洛芬乙酯为唯一碳源,经过富集培养从土壤分离到60多株具有立体选择性水解氟比洛芬乙酯的微生物,其中NH33和C71号菌株的活性高而且选择性最好,鉴定为P.putida NH33和B.Cereus C71,它们水解氟比洛芬乙酯分别生成光学纯的(S)-氟比洛芬和(R)-氟比洛芬。利用P.putida NH33和B.Cereus C71静息细胞水解10mmol/L的底物,通过优化反应条件达到提高酶催化反应速度和选择性的目的,建立小量的化学-生物法拆分工艺,得到光学纯为98%ee的(S)-氟比洛芬和93%ee的(R)-氟比洛芬,产物的总收率为60%。为了去除杂酶,构建P.putida NH33的基因文库,从文库中筛选到一个只表达单一酯水解酶的阳性克隆pNH10,用于水解氟比洛芬乙酯得到>99%ee(99.6%)的(S)-氟比洛芬,其立体选择性比野生型菌株高。
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