食管癌是人类较常见的恶性肿瘤之一，我国尤为高发。虽然在世界范围内有大量基础和临床的研究已经或正在开展，而且，肿瘤生物分子学的部分研究已于近年来取得突破性进展，但是食管癌的诊断水平和治疗疗效目前仍未取得明显提高。为了进一步认识食管癌的起因及影响疾病进程的因素，探索更有效的治疗方法，我们设计了本研究，以期找到能够反映食管癌预后的肿瘤标记物，同时为食管癌治疗提供新的靶点。　　 人类复制蛋白A(replication protein A，RPA)是由70kDa、34kDa和14kDa(RPA1，RPA2和RPA3)3个亚单位组成的一个异源三聚体，其功能为参与正常DNA复制和DNA损伤修复过程。有文献报道RPA1、RPA2在大肠癌组织中高表达，并且表达水平的高、低与肿瘤的恶性程度、肿瘤患者的预后密切相关，又有文献报道辐射敏感型食管癌细胞株其复制蛋白A较辐射抗拒型食管癌细胞株表达下调。据此我们设计了本研究的第一部分，通过回顾我院于2004年1月至2007年10月手术治疗的部分食管鳞癌病例的各项临床指标，并用免疫组化法检测RPA1和RPA2的表达，研究复制蛋白A在食管鳞癌与正常食管鳞状上皮组织中的表达差异及复制蛋白A在食管癌组织中的表达水平及其与预后的关系。结果发现食管癌组织中RPA1、RPA2的表达水平比手术切缘正常食管黏膜组织显著增高，通过相关性分析和预后分析发现复制蛋白A表达水平与食管癌的各项预后指标相关，复制蛋白A表达水平愈高，其预后愈差。　　 根据文献报道和我们的初步研究结果，可以得到以下三个信息：①复制蛋白A除了参与正常DNA的复制外，还在DNA修复过程中起着十分重要的作用。DNA损伤时，复制蛋白A结合在DNA上，和许多与染色体维持、保护、修复相关的蛋白质相互作用，激活细胞周期校正点激酶和DNA损伤后修复信号网络系统，使受损的DNA停止于细胞周期校正点并对其进行修复；②肿瘤细胞对辐射损伤的敏感性与其修复DNA损伤的能力密切相关；③实验发现食管癌组织中复制蛋白A高表达。据此，我们推测复制蛋白A可能参与了肿瘤细胞辐射抗性的形成，从而导致部分食管癌对放射线抗拒。为证实这个推测，并进一步研究通过靶向降低复制蛋白A的表达能否提高食管癌细胞的辐射敏感性，我们设计了研究的第二部分，即通过siRNA敲低辐射抗拒性食管癌细胞株RPA1、RPA2的表达，研究其对细胞辐射敏感性的影响。　　 第一部分：复制蛋白A表达水平与食管癌预后的关系　　 目的：检测食管鳞癌组织和手术切缘正常食管黏膜组织中复制蛋白A(RPA)表达水平，分析复制蛋白A表达水平与临床各项病理参数及生存率之间的关系，以探讨复制蛋白A在食管癌发生、发展中的作用，以及其作为判断预后指标的价值。　　 材料与方法：取自我院2004年1月至2007年10月间食管癌根治术后病理标本，病理类型全部为鳞状细胞癌。手术切缘正常食管黏膜组织取自同一病理标本的阴性切缘。用免疫组织化学法检测食管癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织中RPA1和RPA2蛋白表达情况，并分析其表达水平与各项病理参数及生存率之间的关系。　　 结果：①食管癌组织中RPA1蛋白表达阳性率平均值为65.25％±0.21，手术切缘正常食管黏膜组织中RPA1蛋白表达的阳性率平均值为35.65%±0.16，两组间有显著性差异(t value=3.735，P=0.001)；食管癌组织中RPA2蛋白表达阳性率的平均值为58.90%±0.19，切缘正常食管黏膜组织中RPA2蛋白表达阳性率的平均值为16.71%±0.12，两组间有显著性差异(t value=12.833，P=0.000)。RPA1和RPA2蛋白表达呈明显正相关(r=0.708，P=0.003)。②随着病理分级增高、肿瘤T分期增加、淋巴结出现转移及临床分期晚，RPA1和RPA2表达阳性率增高，P值均小于0.05(Kruskal-Wallis Test)。③全组1、3、5年生存率分别为76.9%、29.85%、23.88%。单因素分析显示淋巴结转移、临床分期与食管癌术后生存率明显相关，P<0.05。RPA1表达水平与生存率关系接近有统计学意义，P=0.0547。而病理分化程度、T分期、RPA2表达水平等与总生存率无显著相关，P值>0.05。　　 结论：①RPA1和RPA2在食管癌组织中高表达，可能在食管癌发生、发展中起着一定作用；也可能是在肿瘤中存在DNA修复需要增强的反馈调节机制，从而导致复制蛋白A的明显增高；②RPA1、RPA2蛋白表达水平有助于食管癌的预后判断，RPA1、RPA2高表达提示可能预后不良；③淋巴结转移和临床分期决定了食管癌术后生存率；RPA1表达水平可能是生存率影响因素之一，P=0.0547(接近有统计学意义)。　　 第二部分：siRNA干扰复制蛋白A的表达对食管癌细胞株辐射敏感性影响的研究　　 目的研究抑制复制蛋白A(RPA)基因表达对辐射抗性食管癌细胞株TE-1R辐射敏感性的影响，并探讨其潜在的作用机制。　　 方法以TE-1为亲代构建辐射抗性模型TE-1R细胞株，然后通过转染RPA1-siRNA和RPA2-siRNA敲低TE-1R细胞株RPA1和RPA2基因表达，并以未转染(Con组)和转染无义序列组(NC组)作对照，应用克隆形成实验绘制细胞存活曲线，求出D0、Dq、SF2和SER值，　　 然后用流式细胞测定细胞周期，观察TE-1R细胞株的辐射敏感性变化。　　 结果①与食管癌细胞株TE-1相比较，TE-1R的辐射抗性明显增加；②TE-1R细胞株经siRNA转染48 h后RPA1及RPA2蛋白表达较Con和NC组降低；③与NC组比较，RPA1 siRNA转染组及RPA2 siRNA转染组细胞的D0、Dq、SF2值由2.09、1.70、0.85分别降至1.67、0.71、0.44及1.82、0.89、0.51；RPA1 siRNA转染组及RPA2 siRNA转染组的放射增敏比：SER Dq分别为2.39和1.91；SER D0分别为1.25和1.15；④抑制RPA1或RPA2表达后可观察到G2/M期阻滞现象，与对照组比较G2/M(%±s)期由18.70±3.14升至26.95±3.96及25.28±2.74(t=2.827、2.853，P<0.05)。　　 结论通过抑制RPA1或RPA2表达可以提高辐射抗性食管癌细胞株的辐射敏感性，其潜在的作用机制可能是改变细胞周期分布，减少了受照射细胞亚致死损伤的修复。