棘孢木霉(Trichoderma asperellum)MAPK家族基因的克隆及生物防治功能研究

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wqiufeng1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
棘孢木霉(T.asperellum)是重要的生物防治菌,通过多种机制防治植物土传病菌的危害。这些机制已经被广泛研究,但是其生物防治的分子机制仍不清楚。为了掌握棘孢木霉(T.asperellum)生物防治的分子调控机制,本论文以棘孢木霉(T.asperellum)菌丝体时期的cDNA文库为基础,克隆了与生物防治相关的调控基因:丝裂原活化蛋白激酶基因task1和裂原活化蛋白激酶激酶激酶基因taskkk,并对其生物防治功能进行研究。首先克隆了task1基因和taskkk基因及两基因的侧翼序列,并对两基因进行序列分析。然后构建双元重组质粒,以潮霉素抗性基因作为筛选标记,采用根癌农杆菌介导法转化棘孢木霉(T.asperellum,)获得task1基因敲除突变体Δtask1和taskkk基因敲除突变体Δtaskkk。将突变体Δtask1和Δtaskkk分别与棘孢木霉野生菌体进行对比,研究task1和taskkk基因对棘孢木霉菌体形态和生长的影响。结果表明:task1基因影响棘孢木霉菌丝生长、分裂、孢子的形成和菌体的生长状态,对生长速度和生长量没有影响;taskkk基因影响孢子的形成,而与菌丝分裂、菌体生长状态、生长速度和生长量无关。然后,对task1和taskkk基因对棘孢木霉重寄生作用的影响进行了研究。结果表明:棘孢木霉突变体Δtask1能识别病原菌,但不能寄生病原菌,只是沿菌丝表面生长,产生细胞壁水解酶,水解病原菌,说明task1基因与棘孢木霉对病原菌的寄生有关;突变体Δtaskkk并不识别致病菌,与病原菌各自生长,说明taskkk基因与棘孢木霉重寄生过程中对致病菌的识别相关。对棘孢木霉、突变体Δtask1和Δtaskkk重寄生过程中的水解酶表达和代谢产生的水解酶活性分析表明:task1基因对纤维素酶基因,β-1,3葡聚糖酶基因,β-1,6葡聚糖酶基因,N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶1,β-1,4葡聚糖酶基因和聚酮合酶基因的表达起负调控作用;taskkk基因对几丁质酶基因,N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶2,β-1,3葡聚糖酶基因,β-1,6葡聚糖酶基因和聚酮合酶基因起正调控作用。对棘孢木霉、突变体Δtask1和Δtaskkk在不同碳源诱导条件下的水解酶活性分析表明:task1基因与N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、β-1,3葡聚糖酶、纤维素酶和β-葡萄糖苷酶的产生有关,taskkk基因与几丁质酶、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶和β-1,3葡聚糖酶的产生有关。最后,对task1和taskkk基因对棘孢木霉抗生作用的影响进行了研究。结果表明:task1基因负调控棘孢木霉聚酮合酶基因的表达,而taskkk基因对聚酮合酶基因起正调控作用,所以task1和taskkk基因在聚酮合酶基因的表达上不在同一条信号传导途径上;敲除task1基因后突变体抗真菌能力提高,而敲除taskkk基因后突变体抗真菌能力降低,说明两基因与抗真菌代谢物的合成都有关,但是两基因作用相反;然后,研究了task1和taskkk基因对棘孢木霉代谢产生的抗生素6-戊基-α-吡喃酮的影响,棘孢木霉野生型代谢产生的6-戊基-α-吡喃酮的量为1.32mg/g菌丝干重,突变体Δtask1为2.80mg/g菌丝干重,是野生型的2.12倍,突变体Δtaskkk代谢产生的6-戊基-α-吡喃酮的量为0.11mg/g菌丝干重,是野生型的0.08倍,说明task1基因对6-戊基-α-吡喃酮合成酶基因起负调控作用,taskkk基因是棘孢木霉代谢产物6-戊基-α-吡喃酮合成酶基因的正调控基因,task1和taskkk基因在6-戊基-α-吡喃酮的合成上不在同一条信号传导途径上。
其他文献
<正>宋代的《集韵》是继《广韵》之后的又一大型韵书,其部头庞大、收字繁多,"字五万三千三百二十五"(《集韵·序例》),相较于《广韵》多收入27331字。同《广韵》一样,《集韵
目的探讨PBL教学法在外科护理学教学中的应用效果。方法进行PBL教学法与传统教学法比较性教学实验,通过对两组护生理论考试成绩比较及问卷调查进行评价。结果教改组护生在理
普通斜管沉淀池前半段斜管去除杂质量已达到总量的70%-80%,而后半段所起作用却很小,有必要增加后半段斜管利用率。以新疆气煤井矿井水扩改工程为例,通过对斜管不同角度、管径
能源经济系统的优化不仅是实现区域节能减排目标的重要途径,更是社会经济可持续发展的主要内容,本文以甘肃省为研究案例,基于计量经济学方法,对其经济增长与能源消耗之间的动
石油作为一种特殊商品,在地缘政治中发挥着不可替代的重要作用。世界石油供给与消费的地理分布及空间运输通道是石油地缘政治格局形成的基本条件,国家、地区和国际组织对三者
师生关系影响留守儿童的人际交往能力,而良好师生关系的建立,关键因素是教师。由于学校、家庭、社会环境的影响,农村小学教师与留守儿童师生关系的建构,需要面对多方面的问题
目的为寻求适合社区高血压病人的健康教育方式 ,更好地普及高血压的防治知识 ,提高高血压病人的生活质量。方法笔者拟在杭州市下城区朝晖街道建立高血压病友俱乐部 ,对高血压
目的探讨多种教学方法相结合的教学模式在外科护理学理论课教学中的应用效果。方法选取我校2011级护理专业学生81人,随机分为实验组(41人)和对照组(40人)。实验组采用多种教
目的探讨不同人格特质的乳腺癌患者手术前后采取应对方式的特点,为临床心理护理提供理论依据。方法采用艾森克人格问卷(EPQ)、医学应对方式问卷(MCMQ)分别对84例乳腺癌患者的
分析了国内外生鲜电商的主要配送模式,并针对我国生鲜电商发展中存在的问题,提出了相关策略。最后以顺丰优选为例,对其配送模式进行了SWOT分析,最后针对企业未来的发展提出了