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本文以生产上为害较严重的植物寄生线虫为靶标,利用系统筛选体系筛选出具有高杀线虫活性的真菌菌株snf44-1,并对其生物学特性、最优化发酵条件、代谢产物的理化性质、杀线虫谱和抑菌谱测定、温室防效及安全性评价方面做了系统的研究。结果如下:
1.从中国11个省共38个地区采集的142份土样中-分离保存了466株真菌,利用自主构建的杀线虫活性物质筛选体系进行生物活性测定,筛选到对根结线虫有杀线活性的真菌菌株41株;其中致死率达到50%的有19株,达到70%的有4株,接近90%的有1株。通过摇瓶发酵进行复筛获得的生防真菌菌株snf44-1具有较高的杀线活性及良好的遗传稳定性。
2.利用传统的形态学分类方法鉴定出菌株snf44.1为嗜松青霉菌。生物学试验表明:snf44-1的菌丝在28~30℃、pH值7~9条件下生长良好,在甘薯50培养基上生长菌落直径最大,其菌丝的致死温度为55℃,30min。试验选定的几种农药中仅50%多菌灵可湿性粉剂对该菌的生长有较为明显的抑制作用。
3.菌株snf44-1发酵液对根结线虫、大豆胞囊线虫等均有较强的杀线活性,对供试的10种病原菌中,仅对水稻恶苗(Fusarium moniliforme)、小麦赤霉(Gibberellasanbinetti)、茄腐镰刀(Fusarium solani)3种病原菌有一定的抑菌作用。
4.菌株snf44-1摇瓶发酵的最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是氯化铵,其最优化发酵培养基配方为葡萄糖(4%)、NH<,4>C1(0.25%)、K<,2>HPO<,4>(0.075%)、KCl(0.1%)、MgSO<,4>·7H<,2>O(0.04%)、Fe SO<,4>(0.001%)。杀线活性物质产率最高的发酵时间为10d。
5.通过对菌株snf44-1发酵液理化性质的初步研究,推断菌株snf44-1发酵代谢产生的杀线活性物质属于水溶性抗生素,并且具有良好的光稳定性和耐贮性。
6.温室盆栽试验表明:snf44-1发酵液对番茄根结线虫初侵染和再侵染具有较好的防效。安全性评价研究结果表明:snf44-1发酵液大鼠急性经皮毒性属于“低毒”级,经口毒性属于“微毒”级。